【原】大肠杆菌基因组编辑技术原理

基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的大肠杆菌基因组编辑服务。成熟的大肠杆菌编辑体系，E.coli BL21, E.coli K-12, MG1655，甚至分离菌株，助您成功实现基因敲除、基因插入和点突变。

大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，由于遗产背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，是目前研究最多的微生物之一。大肠杆菌基因组改造可以发现新的特殊酶基因及重要代谢过程和代谢产物生成相关的功能基因。被广泛应用于生产以及传统工业、工艺的改造，有助于推动现代生物技术的迅猛发展。

基于Red同源重组法的大肠杆菌基因组改造

大肠杆菌基因组编辑的传统方法是利用自身的Red系统对外源进入的DNA进行同源重组，从而实现目标基因的等位替换。通过设计靶基因的同源融合片段，将其克隆至自杀载体中，自杀载体通过接合输入到靶细菌。通过抗生素筛选细菌基因组靶位点整合有自杀载体的插入突变株。在第二轮反向选择压力下，只有大肠杆菌基因组发生第二次同源重组并丢失自杀质粒才可以存活。

基于CRISPR/Cas9平台的大肠杆菌基因组改造

CRISPR/Cas9系统是细菌和古细菌特有的一种天然防御系统,用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。

研究内容

• 大肠杆菌基因敲除（E.coli gene knockout）

• 大肠杆菌基因敲入（E.coli gene knockin）

• 大肠杆菌基因点突变（E.coli gene point mutation）

下游应用

• 抗生素及重要工业用酶

• 发现新的基因功能

• 优化代谢通路，提升代谢产物产量，实现工业化生产

参考文献：

• Selle K, Barrangou R. Harnessing CRISPR–Cas systems for bacterial genome editing[J]. Trends in microbiology, 2015, 23(4): 225-232.

• Su, T. , Liu, F. , Gu, P. , Jin, H. , & Qi, Q. . (2016). A crispr-cas9 assisted non-homologous end-joining strategy for one-step engineering of bacterial genome. Scientific Reports, 6, 37895.