【原】CRISPRi是什么？CRISPRi研究案例

CRISPRi也称为CRISPR干扰 (CRISPR interference or inhibition) 。dCas9与转录抑制子连接，如KRAB（Kruppel associated box），dCas9-KRAB融合蛋白在gRNA指引下，结合到靶基因TSS位点，抑制转录起始，沉默靶基因的表达。

图3. CRISPRi系统示意图。图片来自: ACS Chem Biol. 2018 Feb 16;13(2):406-416. 

CRISPRi 研究案例

dCas9融合KRAB的CRISPRi系统（dCas9-KRAB）在海马神经元中能有效地靶向抑制功能基因的表达，基因沉默水平显著优于传统RNAi技术。

Fig1. CRISPRi efficiently inactivates gene expression in primary neurons.

利用神经元亚群特异性的启动子条件性CRISPRi能精确控制功能基因Syt1在海马齿状回兴奋性和抑制性神经元中丧失功能而不影响Syt1在其它类型细胞中的表达。

Fig2. CRISPRi-based conditional inactivation of Syt1 shifts the E-I balance of the DG.

针对Syt1及其互作蛋白网络的基因Syb2，Stx1a/b和SNAP25a的多重基因CRISPRi系统能够在小鼠脑内实现灵活多变的多基因不同组合的高效失活。

Fig3. Flexible multiplex gene silencing using CRISPRi in the mouse brain.

最新的研究在dCas9-KRAB的基础上进行优化，发现dCas9-KRAB-MeCP2能够更高效地对靶基因表达的抑制。

Fig4. Repression of endogenous genes by dCas9–KRAB–MeCP2.

参考文献：

Zheng Y, Shen W, Zhang J, Yang B, et al. CRISPR interference-based specific and efficient gene inactivation in the brain.Nat Neurosci. 2018 Mar;21(3):447-454. 

Yeo NC, Chavez A, Lance-Byrne A, Chan Y，et al. An enhanced CRISPR repressor for targeted mammalian gene regulation. Nat Methods. 2018 Jul 16. doi: 10.1038/s41592-018-0048-5.