【原】酶联免疫吸附分析（ELISA）诊断试剂盒的归类分析

酶联免疫吸附分析（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学分析方法。一般认为，由于30.02品目注释“诊断试剂盒”一款列有：

使用这种试剂盒所发生的正常反应包括凝集、沉淀、中和、成分结合、血液凝集和酶联免疫吸附分析（ELISA）等。

因此看上去所有的ELISA诊断试剂盒均应归入该品目。但事实上，由ELISA的原理、分类及品目30.02的范围来看，对于ELISA诊断试剂盒归类的这种“一刀切”式的理解其实并不妥当。

1ELISA的基本原理

与其他免疫分析方法一样，ELISA的基本原理是利用抗原抗体反应的特异性，通过将待测物与酶连接，然后酶与底物产生颜色反应，其所生成的颜色深浅与待测抗原（或抗体）的含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。

由于ELISA是基于抗原抗体反应的特异性，这意味着该种方法的测定对象既可为抗原也可为抗体：当被分析样本为抗原时，检测试剂可针对该种抗原产生特异性的抗体；当被分析样本为抗体时，则其目标抗原可用作结合的试剂。

ELISA试剂盒通常包含

（1）已包被抗原或抗体的固相载体，即免疫吸附剂（immunosorbent）；

（2）酶标记的抗原或抗体，即结合物（conjugate）；

（3）酶的底物（substrate），即显色剂；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定），或参考标准品和控制血清（定量测定）；

（5）酶联物（结合物）及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）酶反应终止液。^①

其中，免疫吸附剂、结合物和显色剂在整个ELISA过程中起到最为关键的作用。试验时，使用免疫吸附剂将待测抗原（或抗体）结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（或抗原）与酶的结合物，此结合物仍保留其原免疫活性与酶活性，当结合物与固相载体上的抗原（或抗体）反应结合后，再加上酶的底物进行显色。

2ELISA的主要类型

根据试验过程中免疫吸附剂、结合物与待测物的联结与应用形式，ELISA主要包括夹心法、间接法、竞争法等类型。^②

夹心法

（Sandwich ELISA）

夹心法包括双抗体夹心法测抗原和双抗原夹心法测抗体两种。

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法：先将含有已知抗体吸附在固相载体上，洗涤；加待测抗原，如两者是特异的，则发生结合，把多余抗体洗除；加入与待测抗原呈特异反应的酶联抗体，使形成“夹心”；最后加入酶的底物进行显色。

双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似，即使用特异性抗原包被固相载体和制备酶结合物，以检测相应的抗体。

间接法

（Indirect ELISA）

间接法也是检测抗体常用的方法，其原理为利用酶标记的抗-抗体以检测与固相抗原结合的受检抗体，即将酶标抗-抗体代替双抗原夹心法中的酶标抗原。^③

竞争法

（Competitive ELISA）

竞争法一般用于检测小分子物质，以检测抗原为例：将针对小分子抗体的抗原包被在固相载体上，检测时加入待测样本，使样本中的待测抗体与固相载体上的抗原结合；加入酶标记的抗体，此抗体也可与固相载体上的抗原结合，由于固相载体上固著的抗原数量有限，因此当样本中抗体的量越多，则酶标记抗体可结合的包被抗原就越少，两种抗体竞争结合包被抗原，故称为竞争法；最后加入酶的底物进行显色，待测样本中的抗体越多，酶标记的抗体就越少，此时显色也就越浅，反之亦然。^④

3ELISA诊断试剂盒的归类分析

30.02品目注释第五款的完整表述为：

具有本品目所列任何产品基本特征的诊断试剂盒应归入本品目。使用这种试剂盒所发生的正常反应包括凝集、沉淀、中和、成分结合、血液凝集和酶联免疫吸附分析（ELISA）等。例如，基于pLDH（疟原虫乳酸脱氢酶）单克隆抗体的疟疾诊断试剂盒应归入本品目。其基本特征是由最大程度控制测试过程特性的单一成分所决定。

可见，ELISA诊断试剂盒归入品目30.02的前提为具有该品目所列产品的基本特征，即最大程度控制ELISA测试过程特性的单一成分须为品目30.02所列的产品。^⑤

由于ELISA的测定对象既可以是抗体也可以是抗原，而针对不同的测试对象，采用不同方法的ELISA试剂盒的主要构成也不尽相同，故其实际归类应以构成试剂盒基本特征的物质而定。

当用于检测抗原时，构成试剂盒基本特征的物质通常为品目30.02所列的抗体，故此类ELISA诊断试剂盒可按注释所列归入品目30.02。^⑥

当用于检测抗体时，构成试剂盒基本特征的物质则多为对应的抗原。由于抗原泛指各种能引起抗体产生的物质，而不仅限于细菌、病毒等品目30.02所列的产品，所以许多用于检测样本所含抗体，以抗原为基本特征的ELISA诊断试剂盒并不属于品目30.02的范畴。

例如，对于采用双抗原夹心法测定抗体的ELISA诊断试剂盒来讲，构成试剂盒基本特征的物质即为待测抗体所对应的抗原，而这些物质通常并不属于品目30.02的产品，因此整个ELISA诊断试剂盒实际应归入品目38.22。

另一方面，尽管不少ELISA诊断试剂盒还配有阴性、阳性对照品（定性测定）或参照标准品（定量测定），而这些对照品或标准品一般也含有品目30.02所列抗体或其他产品，但因为这些物质未构成产品的基本特征，所以并不影响诊断试剂盒的归类。^⑦

注

① 对于采用竞争法的ELISA试剂盒，还可包含用于竞争的抗体或抗原物质。

② 所称ELISA“夹心法”、“间接法”或“竞争法”之原理与范畴可因文献或网站中的具体语境而异。

③ 抗-抗体：抗体分子作为抗原诱导机体产生的第二抗体。

④ 尽管竞争法亦可用于检测大分子物质，但由于空间位阻的影响，使得该检测方法没有夹心法检测的灵敏度高。另一方面，竞争法也包括间接竞争法。

⑤ 因此，诊断试剂盒的基本特征应视各单一成分在测试过程中所起的具体作用而定，而非这些组分的含量或价值占比。

⑥ 又见《品目30.02所称“免疫制品”之商品范围注疏》。

⑦ 事实上，含有品目30.02所列产品的检定参照物即使在单独报验时也应优先归入品目38.22。这是因为根据38.22品目注释：“除第二十八章或第二十九章的产品外，检定参照物在本目录中应优先归入品目38.22。”

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