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组织学教学切片制作 (一) 取材专题

 元亨技术 2021-08-04

一、动物选择

以人的材料较理想,但某些组织结构,动物比人的典型,如猪肝比人肝肝小叶清楚,胰岛细胞用豚鼠胰腺观察,豚鼠内耳作内耳柯蒂器切片,兔皮下组织和肠系膜作活体染料注射和单层扁平上皮镀银法,运动终板用猫肋间肌或壁虎尾肌等。再说,人的材料相对来说比较困难,常用动物代替。

常用的动物的:猴、狗、猫、猪、牛、羊、兔、豚鼠、大白鼠、小白鼠等。

表一  动物取材

神经系统、循环系统、免疫系统、内分泌系统、泌尿系统 、生殖系统、特殊感觉器官等
呼吸系统、循环系统、神经系统、内分泌系统、免疫系统、泌尿系统、雄性生殖系统、消化系统部分器官、卵巢等
消化系统、泌尿系统、内分泌系统、神经系统、肌组织等
皮下组织、肠系膜、卵巢、肺、耳廓
心脏、膀胱、雌性生殖系统等
肝脏、骨髓、脑垂体等
豚鼠胰腺、内耳、肾上腺等

表二  动物器官取材

动物组织备注
肝、脾、肾、胰、大脑、小脑、脊髓、脊神经节、有髓鞘神经、交感神经节、气管、大动脉、大静脉、中动脉、中静脉、小动脉、小静脉、淋巴结、输尿管、膀胱、肾脏、子宫、卵巢、输卵管、乳腺、输精管、前列腺、食管、胃、十二指肠、结肠、甲状腺、肾上腺、脑垂体、松果体、眼球、掌皮、内耳、鼻腔、喉、骨骼肌、腮腺、颌下腺
食管、结肠、胆囊、舌、喉、声带、扁桃体、淋巴结、脾、心脏、大动脉、大静脉、中动脉、中静脉、小动脉、小静脉、肺、气管、输尿管、膀胱、输精管、甲状腺、周围神经(坐骨神经)、脊神经节、颌下腺、眼球、胃贲门、胃幽门、直肠肛门交界、鼻黏膜(嗅觉细胞)以小狗(出生三个月)为好
肝、胃、十二指肠、空肠、回肠、肾、肾上腺、脑垂体、卵巢、大脑、小脑、脊髓、脊神经节、交感神经节、周围神经、运动神经末梢(肋间肌)、骨骼肌、平滑肌、掌皮
疏松结缔组织(皮下组织)、肠系膜、卵巢、睾丸、肺、耳廓(弹性软骨)、回肠(潘氏细胞)
豚鼠胰腺(胰岛细胞)、肾上腺、内耳、小肠(嗜银细胞)
心肌、心传导系统、子宫、宫颈、乳腺

肝脏(肝小叶)、骨髓、脑垂体、胆囊、脾脏
大白鼠
皮下组织肥大细胞)、小肠(潘氏细胞)、嘴唇(毛囊游离神经末梢)

尽量使用人的材料:骨发生、血液、骨髓、胸腺、阑尾、头皮、体皮、掌皮、眼球、子宫、宫颈、乳腺、纤维软骨、肌腱等。

二、取材方法

先取腹腔内的器官组织:

先取肝脏、胆囊,其次取胃、肾上腺,再取胰腺、脾、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠等

然后取胸腔及贫腔内的器官组织

最后取神经系统

先对该器官组织作大体检查,是否正常,有无病变等。

(一)肌组织

分三种:平滑肌、骨骼肌、心肌

1.平滑肌  分布于内脏器官姻胃、肠、膀胱、子宫等组织中

2.心肌  分布于心脏

3.骨骼肌  分布于骨骼上。舌肌和食管上段为横纹肌。骨骼肌取舌肌和肋间肌最理想,也可取胸锁乳突肌、缝匠肌。取材时,注意防止因肌纤维收缩引起变化。故固定前,将肌肉纵切一条,两产用线结扎,将结扎两产分别绑在一个自制的弓形玻璃棒上,使肌肉呈直状,再入固定液固定。可避免肌肉收缩引起的纤维形态改变。骨骼肌切片应取纵、横两个切面。

(二)消化系统

1.肝脏

大体检查肝脏有无脂肪充性、充血、寄生虫、肝硬化、肿瘤等。

肝分左右四叶。一般取肝脏右前叶或左外叶中部作纵切或冠状切面,再切成小块分别投入固定液固定。

动物肝脏特别注意肝寄生虫及胆管扩大等情况。肝脏易于脂变。

肝取材不宜过大,因细胞密集,过大则固定液不易迅速渗入组织内,一般 2~3毫米左右。

2.胆囊

先将胆囊与肝脏分离。用无齿镊挟起胆囊,用小刀或剪刀细心地将胆囊与肝脏分离,从一侧将胆囊剪开,倒掉胆汁,用生理盐水充分洗净,然后取材。不要取贴附于肝脏的一面,可在游离面胆囊体部作一纵切面,以字膜面贴附于滤纸上,再固定。另外,也可直接在胆囊游离面体部取材,取下胆囊立即附贴于滤纸上,再放生理盐水充分洗去胆汁,投入固定液固定,不要让镊子损伤胆囊黏膜。

3.胰腺

分胰头、胰体、胰尾三部分。

胰尾的胰岛较多

一般取胰腺的尾部横切,应注意将胰腺周围的脂肪组织去掉,以免影响胰腺组织固定。

胰腺因含多种消化酶而易于自溶,故取材要快。保持新鲜,组织块小,避免自溶变性。

4.食管

选用人或猴或猴食管。其上三分之一段为骨骼肌,下三分之为平滑肌,中三分之一段为骨骼肌与平滑肌。下三分之一段食管腺较丰富。

取下三分之一段作整体横断面,注意保持其黏膜和外膜,防止因组织收缩而变形,要在食管腔内插一圆形击棒再固定,保持食管充盈。

5.胃

分贲门、底部、体部和幽门部。

胃充盈时皱襞减少乃至消失。一般取空虚为好。如胃内有食物,先用生理盐水洗净,再检查胃黏膜是否有充血、溃疡等情况。胃溃疡多见于近幽门部的小弯处。

胃黏膜正常呈灰白色。取材时在胃底或胃体部作一纵切面,因胃腺主要分布于胃底和胃体。组织取出后,洗去胃内的食物残渣,放在滤纸上铺开,防止卷缩,投入固定液固定。

6.十二指肠

人的十二指肠长25厘米,呈C形,分球部、降部、水平部和升部四部分。

一般取降部和水平部。取降部时,应避开胆总管和胰管开口处。十二指肠在剖取时可引起肌层剧烈收缩,黏膜外翻而变形,故取材时可用注射法固定。先将所取部分两端结扎,再注射固定液,量不宜过多,注射后全部投入固定液固定4~6小时,再取材。取材时先除去两端的结扎部分,将十二指肠作横切面,浸入固定液再固定24小时。

7.空肠

(略)

8.回肠

回肠上接空肠,下与盲肠交界。回肠有集合淋巴结。取材时应切取有淋巴结的回肠部分,作横切或纵切。用生理盐水洗去肠腔内容物,再固定。

9.结肠

分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠四部分。前三部分在腹腔中形成倒U形。

一般取横结肠和降结肠纵切面,取出结肠,先在生理盐水洗去粪便。为防止肌层收缩,可附贴在滤纸上,投入固定液固定。

10.阑尾(蚓突)

根部连与盲肠的内后壁,一般长5~10厘米。

一般取人的阑尾。(病理解剖或外科手术)先检查有无阑尾炎,有无充血、水肿等情况。可在阑尾中部作横切面,洗净阑尾腔中的内容物,再固定。

(三)泌尿系统

1.肾脏 肾组织易出现蛋白质变性、混浊肿胀和脂肪变,有时出现肾小管自溶等情况。取材和固定是关键。取材前,先检查肾脏外形,肾各部质地是否一致,被膜是否黏连、有无坚硬和囊样区域。

肾取材有两种方法。一是先从肾脏注射固定液,然后再取材。固定液从肾动脉注入,同时切断肾静脉,使固定液注入的同时肾血液随之排出,不致使肾脏内部管道扩张而影响肾脏原有形态。固定液注射后,连同全肾投入固定液固定2~4小时,再剖开肾脏切取小块组织。二是取出肾脏,保护肾被膜,沿肾外侧缘(凸面)中部直到深部作纵剖面,将肾切成两半,然后在肾件一半再作扇形切面,应切三通皮质和髓质。切取小块组织后,直接入固定液固定24小时,再按常规处理。

2.输尿管

上八分子二只有内纵、外环两层。下八分之一有三层(增加外纵层)。一般取输尿管下分之一段,作整体横切面。

3.膀胱

应注意生理情况。膀膛充盈(扩张)时,膀胱上皮只有2~3层细胞;膀胱空虚(收缩)时上皮有8~10层。以收缩期为主。一般取收缩时的膀胱组织。

取材时,沿膀胱前壁正中线切开,在膀胱体部作纵切面。切取膀胱组织时引进膀胱平滑肌收缩,可将其附贴在滤纸上,然后再固定。

腹部器官取完后,再打开胸腔取材。

开胸腔应用软骨刀,在胸骨两侧肋软骨与硬骨嫌接处切开,注意刀尖不要切破下面的肺。肋骨发断后,提取肋骨弓,将胸锁关节用解剖刀自后部剖开,把切除的胸骨和肋骨全部拿掉,露出胸腔,再取材。

(四)呼吸系统

1.肺

位于胸腔,左肺两叶,右肺三叶。

应取肺小叶中部作横断面。能全面看到肺内小支气管、细支气管、终末细支气管、呼吸性细支气管、肺泡囊、肺泡管、肺泡等结构。

肺内有空气,固定液难以渗入,脱水 较困难。可用注射法固定,由肺支气管或肺动脉注射固定液。从支气管注射时,一定要慢,量不宜多。过急过量都会使呼吸性细支气管和肺泡破裂,将肺投入固定液固定6~12小时后切成小块。

肺的脱水、透明比一般组织长,可高于2~3倍。以肺沉于溶液中为度。取材前,应观察肺的大体情况,是否充血,有无肺气肿、肺脓肿、播散型肺结核及且黏连等情况,肺组织正常方能取材。

2.气管

(略)

(五)循环系统

1.心脏

先剪开心包膜,用在手持心脏,将上腔静脉与下腔静脉分别切断,再将肺动脉和肺静脉在距瓣膜3厘米处切断,并将主动脉在离主动脉瓣4厘米处切断,取出心脏,取左心室。

先用解剖刀在左、右肺静脉入口之间与左心房联系起来作一直线,沿心脏左缘至心尖部切开,再由心尖部沿心室中隔平行线切开左心室的前壁和主动脉。一般取左心室乳头肌部位,沿乳头肌长轴作纵切面,在乳头肌上有较丰富的浦肯野纤维。

若观察心脏传导系统,可取窦房结和房室结。窦房结位于心脏的上腔静脉入口和右心耳连结处,在该部取材作纵切。须切入深部才能看到窦房结。房室结在左心房的心内膜下,恰在三尖附着处。

2.动脉和静脉

一般作 横切面。

大动脉和大静脉:取主动脉和上腔静脉或下腔静脉

中等动静脉:取肱动静脉、股动静脉及尺动静脉并行支

小动脉:直径在1毫米以下。较大的动脉或静脉外膜都有小动脉,各器官都有。

(六)免疫系统

1.胸腺

一般用人的胸腺。

胸腺位于胸腔纵隔内,形状大小随年龄而异。

应取初生儿胸腺。年龄增长,其胸腺逐步退化。

2 淋巴结

为大小不等的扁圆形、卵圆形或豆形器官,质柔软,正常时为灰白色。

一般取肠系膜淋巴结、髂内淋巴结和颈部淋巴结。作纵切面,固定时切开,否则固定液不易渗入髓质中央。

3 脾脏

新鲜脾脏呈暗红色。

注意脾形状和大小,被膜有无增厚和黏连情况,白髓是否明显。

取材时先用生理盐水从脾动脉注射冲洗,同时切断脾静脉。必要时切开脾脏两端,以便其内部血液迅速被冲洗出来。用生理盐水充分将脾内血液冲净至脾脏呈灰白色,可清晰显示脾索和脾窦。横切面,按常规方法固定。

(七)生殖系统

1 子宫

子宫为梨形肌性器官,上宽下窄,分四部分:输卵管以上凸起部子宫底;底部下较宽大的部分为子宫体;再下段狭窄,呈圆柱形为宫颈。

取材:自宫颈至子宫体中心部前壁正中切开,再分别向两侧乾输卵管对角方向切至子宫左右角,即输卵管相连处,整个发口呈Y字形。打开子宫后,先检查子宫内膜是否平滑、有无肿瘤]有无出血和其它物质。宫内膜与宫颈黏膜分界是否清楚。取子宫体前壁部分纵切。包括子宫内膜、肌层和外膜全部。宫颈一般作矢状切面。
2.输卵管

一般在输卵管壶腹部或峡部作横切面。注意检查管腔是否肿大、有无内容物。如有病变则不能用。

3.睾丸

人的睾丸过大,难于作整体切片.一般用猴\兔或大小白鼠睾丸.

从外侧缘切下,直到切到附睾及睾丸输出小管,分成两半,然后固定。睾丸整体固定效果不太好。也可用注射法固定。由睾丸动脉注射固定液,切断睾丸静脉。注射后继续在固定液中固定。


(八)神经系统

神经系统包括中枢神经系统和周围神经系统。

中枢神经系统包括脑和骨髓。

周围神经系统包括脑神经、脊神经和植物性神经。

1.脊髓

脊髓上端与延髓连接,下端渐尖呈圆形终止于尾椎。

脊髓有两个膨大部:颈膨大和腰膨大。

取材:先在背部自枕同突起沿锥骨棘突一侧至骶骨止作一长切口,剥离背棘上的软组织及椎弓上的骨膜等。用骨锯锯开两侧椎弓,将棘骨和椎板用骨剪一一钳掉,露出脊髓。取毛植物石膨大部分作横切面,并连同双侧的脊神经节取下,平放在滤纸上再固定。 

2 神经纤维

有髓神经纤维取材,一般取坐骨神经和股神经。取其绷、横切面,因神经纤维切断时收缩变形,故在固定前,将神经两端用丝线扡起来,将结扎的两端分别绑在一个自制的弓形玻璃棒上,固定好后再将神经从弓形玻璃棒取下冲洗。

3 大脑和小脑

先用骨锯锯开颅骨,锯时不要伤及脑组织。取下颅盖,露出硬脑膜。用剪刀沿正中线矢状窦剪开,将硬脑膜完全除掉。取脑时可用左手四指插入额叶与颅骨之间,把额部脑组织向后抬起,露出嗅神经和视神经,切断视神经,颈内动脉和中脑漏斗,将整个大脑向后托起,蒋用刀尖或剪刀割开小脑慕䥥。为防止大、小脑向外下垂,可用在手将其托起,轻轻向后拉出。然后对各对脑神经切断,再用解剖刀伸入枕骨大孔内切断脊髓,随即将完整的大、小脑从颅出取出。

取材时,用切脑刀或刀片,取大脑组织一般是切取大脑半球中央前回和中央后回部分,作冠状切面。将大脑组织切为小块,平放在滤纸上,再固定,防止变形。

小脑取材可在小脑蚓部作纵切面。

延脑和桥脑可作横切面取材。

(九)感觉器官

1.眼球

眼球外部为眼球壁,内部为屈光装置。

整体取材:摘除眼球时细心剥离眼眶内与眼球联接组织,切勿伤及眼球壁,眼球视神经保留5毫米左右,切断视神经将眼球取出。将固定液从后房注入,也可由颈动脉注入,量不宜太多,至眼球壁稍扩张即可。眼球组织必须新鲜,否则视网膜易剥离。

眼球体积较大,巩膜系致密结缔组织,眼后方充满玻璃体,有的组织很脆硬,如晶状体经固定脱水后质地变硬变脆,内部构造较细微,制片产困难。一般用火棉胶切片。眼球脱水至0%酒精后,在眼球壁两对侧打开两个小窗口,让脱水剂和火棉胶充分浸透。

2.内耳

一般选用豚鼠内耳:易于取材;且结构较典型,适用制作教学标本。

内耳由骨迷路和膜迷路组成。前庭和半规管的𣬰迷路内有位觉器。耳蜗膜迷路内有听觉感受器即Corti器。取材地应将整个内耳取下,用注射法固定,将整个内耳投入固定液 固定。一般平外耳道水平切片,观察全部结构。切片时保留Cori器的完整 。

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