【原】HE染色

HE染色

HE染色总的原理，是利用组织的酸碱差异，通过酸碱中和反应，生成紫色和红色的对比色来反映组织的特征。

所以，如何把握好这种染色过程中的色泽深浅，就需要在操作中总结出经验，不断的根据每一步操作后的色泽变化，调整后续的操作时间。

总的来说，HE染色过程中，每一步都有一个详细的操作时间，但这个操作时间，并不是固定不变的。但只要记住其主要目标，就是染出明显的紫色和红色，而且要求紫红分明，如果能反映出三种以上的不同红色，那就完全达标了。

这里记录一下HE染色的操作过程。

01

首先是脱蜡，脱蜡分成四步，第一步是用二甲苯，浸泡10-20分钟，如是冬天，温底越低，那这个时间就按上限来浸泡，因为分子的布郞运动要慢一些，反映时间也会拉长。其次是要注意的是二甲苯是高致癌物质，操作时需要开窗，同时要带口罩，且是加有吸碳层的口罩。然后进行第二步，同样时间也是10-20钟。第三步无水乙醇，3分钟，第四步是用时1-3分钟，操作时注意观察，当发现蜡块多，则用时稍长。

02

脱蜡后，就是进行脱水，分三步。第一步是95%酒精脱水3分钟，也有的说是数秒，数秒按我的理解，应该是在温度比较高的时候适用；第二步是用85%酒精脱水3分钟，这一步同上，只是酒精浓度的变化；然后到第三步，75%乙醇3分钟。脱水之后就是水洗，冬天5-6次，夏天3-4次，这个次数纯属个人理解，根据情况而定，只要滴下来的水没有颜色就可以了。

03

苏木精染色，就是利用苏木精是碱性，而细胞内的胞核是酸性，所以酸碱中和，最后细胞内的胞核和苏木精产生反应，产生颜色改变生成紫色。

所以判断这一步的标准，就是看细胞内的胞核有没有染成很深的紫色，这一步要比需要的紫色深一点，不然再经后面的脱色和水洗之后，颜色就会变浅。

平时我们看到的白细胞中的嗜碱细胞、淋巴细胞、中性细胞的胞核都会被染成紫色。这里还有一个要注意的是，由于冬天温度低，除了延长染色时间，还需要把苏木精染色剂放到恒温箱进行加温，把温度设定到37摄氏度。而且最好是在一开始做时，就把苏木精染色剂放到恒温箱中。

先进行10-20分钟的染色，然后进行显微镜观察，如果能看清细胞核染色很深，则就可以进行下一步染色，不然就需要再进一步延长染色时间。

04

当伊红染色后，就是水洗数次至无色后进行脱水处理，如果发现颜色不是很深，那就可直接省掉75%酒精脱色这一步。85%酒精数秒，到95%酒精数秒，这两步有的试剂是要求3分钟。

接下来就是无水乙醇，两分钟，有的是要求5-10分钟，然后是第二步无水乙醇5分钟，有的要求时间到5-10分钟，这个同样是根据颜色的深浅，如果颜色浅，那就时间短。

最后两步是二甲苯，这个时间长短并无影响。通常10-15分钟，或是更长时间也无影响。

封片这一步所以注意的就是中性树脂，不要滴得太多或是太少，然后注意尽量放慢放盖玻片的时间，这样才能尽最大可能减少气泡的产生。最后就是烘干两到三小时保存。

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