【原】细胞凋亡的早中晚期过程变化

01细胞凋亡早期

细胞凋亡比较早期时，细胞膜即出现了一些改变，细胞膜磷脂双分子层中的磷脂酰丝氨酸从细胞膜内翻转到细胞膜外，暴露于细胞膜；Annexin V 是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，在Ca2+存在的情况下，与磷脂酰丝氨酸有很高的亲和力，因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。当AnnexinV 被荧光素标记时，可在流式细胞仪上或荧光显微镜下检测到早期凋亡的细胞。同时，也可以利用PS外翻到胞外，利用其PS抗体进行检测。

02细胞凋亡中期

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶，通常以无活性的原酶形式存在于细胞中。其中Caspase 2、8、9及10作为起始Caspases，Caspase 3、6、7作为执行Caspases。在细胞凋亡中期，效应的caspases会被激活，可以通过检测凋亡细胞的caspases活性及筛选caspases的激活剂或抑制剂，达到检测caspases活性的目的。其检测可以利用免疫捕获法、抑制剂结合法及抗体WB检测法。关于筛选凋亡的指标进行WB检测法，Arigo提供了细胞凋亡指标的抗体对，相同的价格可以购买两支抗体。如Apoptosis Marker Antibody Duo (Caspase3, PARP)及Mitochondria Apoptosis Initiator Antibody Duo (APAF1, Cytochrome c)。

03细胞凋亡晚期

细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为TUNEL法。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。

DNA的片段化检测：组成染色质的DNA链被激活的核酸内切酶切割，可形成180-200bp或其整倍数的片段化，电泳中呈特征性的“梯”状条带，这是判断凋亡发生的客观指标之一。