基线(baseline):通常是3-15个循环的荧光信号,同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线。 阈值(threshold):自动设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。 手动设置:置于指数扩增期,刚好可以清楚地看到荧光信号明显增强。同一次反应中针对不同的基因可单独设置阈值,但对于同一个基因扩增一定要用同一个阈值。 Ct值:与起始浓度的对数成线性关系 分析定量时候一般取Ct:15-35.太大或者太小都会导致定量的不准确。 相对定量:通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因之间的表达差异,一般是 2-△△Ct。或者是考虑扩增效率的Pfaffl法。 |
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