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细胞培养技术有哪些应用?细胞培养最重要的优点为研究对象是活的细胞,在实验中可根据要求始终保持细胞活力,并可长期地动态观察和检测活细胞的形态、结构和生命活动等。以细胞培养为研究对象,建立细胞生物学基本实验模型,研究致病因素与细胞的关系、药物对细胞的影响、衰老过程及其诱导因素。细胞培养技术使研究人员能够清楚地了解正常细胞...
C2C12细胞培养方法。在骨形态形成蛋白(BMP-2)的作用下,该细胞可由成肌细胞分化为成骨细胞。1.常规方法收集对数期的贴壁 细胞或悬浮细胞于离心管中。2.按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的大小计算所需冻存细胞数(参考数量: 5x10^5~ 5x10^6cells/mL)。可能是细胞接种得太少,细胞密度太低。在培养过程中,保持细胞汇合度30%~90%每一步操作...
眼科剪剪断两端骨骺,显露骨髓腔,放置于 10ml 含体积分数为10%胎牛血清的新鲜DMEM 完全培养液的无菌培养皿中,取出 1mL 注射器,用镊子钳起骨头的一端,并用注射器吸取完全培养液冲洗骨髓腔至另一培养皿中,由一段骨髓腔冲出骨髓, 重复 3 次,再反方向冲出骨髓,重复 3 次。吹打细胞悬液,以便分散细胞,收集骨髓悬液于 15 mL 离心管中,1000...
细胞培养基常见问题汇总。因为在-20℃下,培养基中的盐容易析出,培养基融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致培养基渗透压降低,培养细胞时,细胞容易破裂而死亡。培养基保存于4℃冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。13.干粉培养基里含NaHCO3吗?每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原...
Western blot蛋白质印迹实验常见问题。1.为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?13.要验证某个细胞上有无该蛋白的存在,需要做免疫组化和western blot试验吗?检测样本不表达目的蛋白选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性。抗体不能识别测试种属的相关蛋白购买抗体前应当认真阅读抗体说明书,确定其是否能够交叉识别测试...
非探针类则是利用荧光染料(如SYBR Green I)或者特殊设计的引物(如LUX Primers)来指示扩增的增加。在PCR反应体系中,加入过量 SYBR 荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。Ct 值与起始模板的关系研究表明,每个模板...
Real-time qPCR数据分析方法。基线(baseline):通常是3-15个循环的荧光信号,同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线。阈值(threshold):自动设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。同一次反应中针对不同的基因可单独设置阈值,但对于同一个基因扩增一定要用同一个阈值。相对定量:通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因之间的...
细胞周期同步化有哪些方法?为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋亡,故常需借助某种自然或人工的实验手段,使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同一时相的现象,这就是细胞同步化技术。此方法也比较简单,将细胞培养至指数生长期,加入秋水仙素,使培养基最终浓度为0.25~0.5μg/mL,作用6~7min,收集细胞800r/min离心5~1...
he染色原理和注意事项。当改变染色液的酸碱度时,如pH值升高,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。因此,染色液的pH值可以影响染色的反应。染色液的pH值可以影响染色的反应,因此pH值的调节尤为重要。若染色太浅,则应重新进行染色后再分色,总之必须分色至细胞核清晰而背景基本无色...
he染色过程中有哪些注意事项。染色液的pH值可以影响染色的反应,因此pH值的调节尤为重要。一般以细胞核染色比较清晰,细胞质等基本无色为宜。若染色太浅,则应重新进行染色后再分色,总之必须分色至细胞核清晰而背景基本无色才能往下操作。切片经酒精脱水后,如在转入二甲苯时有浑浊现象产生或呈白色不透明状态,此为脱水不彻底,应立即将切片...
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