【原】细胞传代培养的具体步骤及注意事项

①吸除培养瓶内旧培养液。
②加入2ml无菌PBS洗液轻轻润湿细胞，随后吸弃洗液，动作轻柔，不可吹打到细胞。
③向瓶内加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液约1ml，以能覆满瓶底为限。
④置温箱中2-5分钟，一旦镜检发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，细胞变圆，比较松动后，立即终止消化。
⑤加入与消化酶等体积的细胞培养基1mL（T25培养瓶）终止消化。
⑥通过吸管吸取培养基轻轻反复吹打瓶底细胞，使之从瓶底脱离形成细胞悬液。尽可能将细胞吹成单个细胞，这样既能减少死细胞，又能便于细胞再次均匀贴壁生长。

⑦将细胞悬液转移到15ml离心管中，并置于离心机中，800-1000rpm，室温离心5分钟。

⑧离心后，去除上清，并取适量新鲜培养基重悬细胞沉淀、混匀。依据传代比例，将细胞悬液分瓶，再补充培养基后，静置于37℃温箱培养，直至贴壁。

注意：悬浮细胞传代则不需用胰酶消化，直接通过计数算好传代的比例，直接分瓶，补液。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，避免吹打。