如何进行细胞传代

首先我们需要了解什么是细胞传代？细胞传代是将细胞从现有的培养物分开或分出来开始新的培养，并加入新鲜培养液来促进扩增的常用手段。

根据细胞生长方式的不同，传代方式可分为两种类型。对于悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代。贴壁生长的细胞则用消化法进行传代，下面我们将介绍贴壁细胞消化法进行传代的的基本步骤。

镜下观察细胞密度达80%~90%即可进行传代培养。

Step1：弃去培养瓶内上清，用不含钙离子、铁离子的PBS润洗细胞1~2次。

Step2：向培养瓶内加入2ml消化液——胰蛋白酶，置于37℃孵箱中消化5min左右，于显微镜下观察细胞消化情况至大部分细胞变圆脱落。

Step3：迅速将培养瓶拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml培养基以终止消化。

Step4：轻轻打匀后吸出，转移至离心管，在1000rpm，10℃条件下离心5min

Step5：弃去上清液后加入1ml培养基，轻轻吹匀。

首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿或培养瓶中，建议冻存一支备用，后续传代则根据实际情况按所需比例进行。

Step6：将培养瓶于操作台按倒“8”或“十”字充分混匀后置入孵箱。

传代完成。

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