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最近碰到了很多老师想要做细胞的体外培养，她们无一不面对一个问题，我需要的目的细胞应该如何提取出来呢？ 对某类特定细胞的提纯提取，我们常用的方法有两大类： 1. 利用细胞的一些物理/生理特性进行提纯； 2. 利用细胞的一些特定biomarker进行抗原/抗体结合的提纯。 前者主要是进行一些“粗提” 例如利用细胞密度不一致的原理，从外周血中提取淋巴+单核的混合细胞PBMC，或者是直接提取粒细胞；以及我们可以利用单核细胞的贴壁特性，从小鼠骨髓中提取pbmc，然后保留培养后贴壁的细胞即为单核细胞。 后者则是更加精确的提取，例如我们要分选小鼠的Th细胞，可以用CD4标记小鼠的细胞，然后通过流式分选或者磁珠分选把CD4+的细胞拉下来，这样就能得到更加纯度高的Th细胞了。 而在利用细胞特异性marker进行细胞分离的方法上，目前有2个大分支，分别就是上述提到的磁珠分选和流式分选。 磁珠分选是基于抗体对抗原的特异性识别，使用磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连，在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的一种实验方法： 很多老师都会存在一个疑问，到底是选用磁珠分选，还是流式分选完成自己的细胞分选实验呢？今天主要根据这个给大家进行解答。 首先，我们从实验目的和实验需求出发，如果我们分选下来的细胞后续需要进行培养实验，也就是要求有一定的细胞活性和增殖力，此时肯定是磁珠分选优于流式分选的。 磁珠分选的细胞活力会更好，并且因为磁珠分选的工具可以很好的放进无菌台中，所以也不用太担心细胞分选后的染菌问题。 而流式分选因为仪器环境的问题导致分选后很容易污染，且细胞的状态和活性都会很差（流式分选的原理是细胞过电），后续在培养就很难养好了，即便养起来对实验结果的干扰也是不可预估的。 那么 流式分选是不是就一无是处呢？ 并不是，我们从待分离细胞本身出发，举例来说，之前有老师要分选造血干，lin(8-10个抗体) c-kit, sca-1 CD150 CD48CD135需要10－14个抗体同时染色，如果此时使用磁珠，恐怕是相当不靠谱的选择。 而选择流式分选，就能更加精准的得到目的细胞了。 另外针对一些及其微量的细胞，直接用磁珠分选出来的纯度其实是打折扣的，我曾经就碰到一例老师从充满粒细胞的腹水样本中分离CD4，结果不论怎么分得到的CD4纯度都达不到90%，这是因为初始的CD4被大量其他杂细胞干扰，从而降低了磁珠分选的纯度。 而此时如果使用流式分选，则就不会有这种困扰了。 所以究竟是选择磁珠分选还是流式分选得到您的目的细胞，还是要综合细胞的marker是否足够磁珠分选，细胞在原始细胞群中的含量，细胞分离后的实验目的等多个方面进行判断，从而选择合适的方法进行最终的实验。 |
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