生化反应曲线应用：别让底物耗尽骗了你

来源：检验时间

作者：钟金清

生化反应曲线可以提供给我们很多有用的信息，今天我们就以临床上非常常见的高浓度 ALT 导致的底物耗尽的反应曲线来实战分析一下，到底怎么让反应曲线来帮助我们找到问题并减少误差，以免误诊。

底物耗尽实例

下图是一个底物耗尽的 ALT 结果，第一次检查时不显示结果提示抑制，复查后结果为 4U/L。

反应曲线如下图（图 1)：

我们都知道 ALT 的检测方法是速率法，它的大小与反应阶段（c-d）反应曲线的斜率成正比，a 点（0s）是样品加入时间，然后反应曲线迅速下降，达到 b 点时反应已经停止或到达平衡，可是这个时候仪器还没有开始读取反应吸光度，仪器读到的吸光度是 c-d 段，此时反应已经停止或者平衡，因此曲线近乎水平线，斜率也接近 0，所以仪器给的结果非常低，然而真实的斜率应该是 a-b 这段曲线的斜率。这种情况说明 ALT 的活性非常大，底物在反应读取之前就已经耗尽，仪器给的结果跟真实值差距非常大。

但由于出现这种情况时，该项目的检测值会跟其他项目有明显矛盾，结果也跟临床表现天壤之别，而且大部分仪器会有报警信息，因此这种情况，检验人员一般都可以发现异常并及时纠正，通常的做法是对标本进行稀释，但稀释倍数如果不对，可能会得到差别很大的结果。

下图是同样这份标本对倍稀释后的结果和反应曲线（图 2）：

对倍稀释后检测结果为 358，查看反应曲线，发现同样存在平台期（c-d），也就是反应的底物在 c 点的时候已经耗尽，此时仪器读取的反应曲线是 b-d 这条曲线（黑色线是我画上去的）的斜率，而真实的斜率应该是 a-b-c 这段曲线的斜率，明显斜率变小了，因此检测结果还是明显低于真实值。

而这种情况，由于检测结果有出来，结果似乎也符合临床，如果仪器上面的检测参数没有设置报警参数（绝大部分厂家都没有设置，或设置到最大限制，起不到报警作用），那这种情况就非常容易引起误诊。

比如，假如这个病人诊断肝炎后积极治疗，过段时间后肝炎好转，ALT 开始下降，随着 ALT 的下降，底物耗尽的时间会往后退（c 点会慢慢向 d 点移动）直到最后 a，b，c，d 成一条直线，这时检测结果才是真实值。

但在这个过程中，随着 c 点向 d 移动，b-d 的斜率慢慢上升，ALT 的检测结果会慢慢上升，但其实病人的真实ALT是一直在下降。这样就很容易给临床带来误诊，以为治疗无效而且反而肝炎加重了。

另一方面，由于高胆红素，低转氨酶的肝功能报告，很容易给临床医生「胆酶分离」的假象，使医生在评估病情时出现误诊。

那么该标本的「真实」ALT 是多少呢？下图是样品稀释 10 倍之后的检测结果和曲线（图 3）：

从中我们可以看出 a-b-c 是一条直线，说明这是一条正常的反应曲线，该样品的 ALT 真实值是 3090（309×稀释倍数 10）。

如何避免底物耗尽带来的误差

一方面，在审核报告时，要综合考虑整张报告单各个项目的结果，对有疑问或者矛盾的项目结果，要查看反应曲线，并及时与临床医生沟通，结合病人的情况评估检测报告是否存在偏差。

另一方面，可以借助生化仪上面自带的参数设置，设置好底物耗尽的相关参数，让仪器自动报警。

由于不同厂家的仪器所给定的参数不同，底物耗尽的参数大概分两种：

1. 线性度：一般厂家设定的线性度为 15%，其含义就是所有检测点的 O D 值与理想拟合曲线的线性相关度要在 15 %之内 , 超出这个范围就是超限 , 仪器对此结果就会报警。以图2为例，反应阶段读取的曲线是 b-c-d，而最后计算的曲线是 b-d，明显可以看出c点远离了 b-d 直线，c 点附近读取的吸光度都偏离大于 15%，仪器会报警。个人意见，15%的线性度有些大，最好设置在 10%以内，以保证结果的准确性。

2. 吸光度限值或者反应界限：也就是单位时间内吸光度的变化（上升或下降）不能超过多少，或者初始反应的曲线斜率不能超过多少，以保证在读取反应阶段的吸光度结束前，底物都还是充足的。但由于这个参数的设置跟底物的量，反应阶段开始和结束的时间设定等都有关系，因此这个参数没有定值，厂家一般不会给这个参数值（除非是封闭系统），因此如果要设置这个参数，需要检验人员自己用一个最大线性左右的样品，通过这个样品的吸光度变化来计算这个参数。