【原】第三代免疫分析技术——感染类研究领域用户专访（MSD）

优宁维 2022-05-13

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人类发展进程中，感染性疾病一直是严重威胁人类健康的重大疾病。随着现代化管理和生命科学技术的进步，感染领域的专家学者使用各种生物学技术方法对疾病机制，源头预防及病患康复治疗等多个层面进行深入研究，为感染疾病的有效控制起到了极大的帮助。

本期小优邀请到了相关领域的研究者，看看她们在感染病的免疫学检测中涉及的技术平台使用感受。

>>>浙江大学医学院附属第一医院MSD设备平台<<<

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小优：史博您好，我是小优，很高兴有机会跟您做这次采访。请问您主要研究什么方向呢？
史博：我们主要关注新发、突发传染病，近几年新冠领域关注也会比较多。
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小优：新冠研究中您们对SARS-COV-2 IgG, IgM, IgA，中和抗体以及新冠疫苗的血清学检测这些是否都会比较关注？
史博：是的，例如中和抗体我们会用活病毒的中和实验来检测，其他抗体的检测我们会用到Elisa。在疫苗研究中，我们会用MSD试剂盒检测打过疫苗的小鼠血清里面的细胞因子。
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小优：史博您们的实验方法和平台也是非常齐全。最近全国各地因为Omicron变异株，疫情出现反复，而且无症状感染者人数庞大，这块儿您们在开展相关研究吗？
史博：我们之前研究的主要是住院确诊病人，这些患者都有一些表现症状。无症状现阶段还比较少，这个是我们接下来会去关注的。
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小优：嗯嗯，相比于确诊者，无症状患者血清学研究挑战更大，很多细胞因子分泌浓度非常低，需要更高敏的检测平台了，相比传统的方法，MSD的Splex飞克高灵敏试剂盒会是一个更好的选择。
史博：我们会根据研究目的选择不同的检测平台：我关注的指标以及检测方法的性价比。比如说一些探索性的实验我们会选择多因子、并且要求线性范围广、灵敏度高的技术平台；如果是一些明确了指标的，我们一般会用传统的方法。
Q
小优：是的，开展探索性的实验对技术方法线性范围和灵敏度会有一个更高的要求，MSD可以达到5log的宽线性，fg级别的灵敏度，您们现在这个平台使用感受如何？
史博：我们用MSD已经做了一些多因子检测的项目，使用的是成品试剂盒。整个实验操作很简单，仪器和电脑的软件使用比较人性化，尤其是可触屏界面，操作很高级。
Q
小优：是的是的，您们是SQ120MM新款的设备，控制电脑升级了触摸屏，高级并且丝滑。除了成品试剂盒，我们非常多的新冠疫苗研究单位在用MSD来进行开发实验，您们后续有此类的项目，可以随时联系我们，MSD专业的应用科学家团队可以提供及时可靠的项目技术支持。
史博：好的，非常感谢。我们其实建议MSD可以多提供一些线上线下的讲座，尤其是技术应用，设备使用还有软件分析这些方面。
Q
小优：好的呀。我们每年会有两次大型的用户培训会，会议包含MSD前沿应用，开发实验，设备使用多个内容，去年12月刚进行过一次。
史博：哦，那次我没有参加到。
Q
小优：最近我们在B站也开展了MSD线上系列课程，不同的应用领域都有专题学习视频，而且系列课程打卡学习之后还能参与抽奖。这个课程我们让优宁维同事可以分享给您一份。也非常感谢史博的时间，祝您实验顺利！
史博：好的，谢谢！

MSD技术优势：

美国Meso Scale Discovery (MSD) 电化学发光技术是业内公认的多因子检测金标准技术，中国百家研发企业和重点实验室均在使用。MSD技术被广泛应用于感染类疾病研究中，在新冠疫苗、新冠中和抗体药物、23价肺炎疫苗等多种疾病药物的研发上也发挥着重要作用，只需25ul珍惜血清样本便可分析6种免疫球蛋白亚型、组合检测10种细胞因子，且在多价疫苗的血清学评估、多种中和抗体检测中大大的提高实验通量、节约样本和时间。

IL-4、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-17A等细胞因子浓度低于pg/ml级别，而普通ELISA试剂盒的灵敏度在pg/ml级别。因而传统ELISA试剂盒无法检测到此类细胞因子，阻碍了免疫学研究。《Cell》及《Nature immunology 》文章中均使用电化学发光免疫分析技术MSD的S-plex 试剂盒获得fg/ml级别的细胞因子数据，解决了使用普通ELISA试剂盒无法检临床样品中此类低浓度细胞因子的世纪难题。MSD S-plex试剂盒灵敏度可达到fg/ml级别，比ELISA试剂盒的灵敏度提高1000倍。

MSD应用案例分享：

法国巴黎研究团队（Bichat-Claude Bernard大学等）发现，在COVID-19患者中，IL-15和IL-18水平也随着疾病的严重程度而升高，并且IL-18与致命结局患者的MAIT细胞活化密切相关。在这些病人中，干扰素-α2水平与IL-18升高呈负相关。IDU和ICU患者的单核细胞也存在这种细胞因子失衡。在体外感染的早期阶段，巨噬细胞产生大量的Ⅰ型干扰素，在感染后4天左右消失。这与SARS-CoV-2通过结构和非结构病毒蛋白抑制I型IFN产生的能力是一致的，正如在ICU患者血浆中发现的那样。单核细胞的转录分析显示，在重症监护病房患者中，I型干扰素应答转录因子表达下调，而NLRP3炎症途径表达上调，与IL-18表达增加一致。对同一患者的MAIT细胞的分析显示，严重疾病患者的MAIT细胞GzB产生与CD14+CD16+单核细胞亚群增加密切相关。

使用MSD电化学发光免疫分析法测定细胞因子IFN-α2a、IL-15、IL-18和IL-1β ，样品来自注射用干扰素（IFN）治疗的COVID-19存活患者（来自IDU，ICU，死亡患者Deceased）的血液。检测限以下的值未进行统计计算，也未显示。

IFN-α2定量：血浆样品用MSD的飞克灵敏度S-PLEX人干扰素-α2a （货号K151P3S-1，www.mesoscale.com ）使用25 μ / 样品，每个血浆样品测定两次，并使用MSD 超敏多因子电化学发光分析仪Quickplex SQ120检测。干扰素-α，与IDU患者相比，ICU患者血清2水平显著降低，但存活ICU患者与死亡患者之间无显著差异。干扰素-α2 ICU患者血浆中IL-15和IL-18浓度较IDU患者升高。

干扰素-α2血液浓度与通过MAIT细胞的干扰素-γ，肿瘤坏死因子和白介素-2的产生呈正相关。非存活ICU患者血，IL-18浓度与IFN-α2呈负相关血液浓度。

长期ICU患者血清中IL-18浓度升高，而IFN-α2血药浓度下降。

MSD感染相关成品试剂盒推荐：

品名	货号	检测指标
V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Mouse Kit	K15048D	IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, KC/GRO, TNF-α \| Mouse
V-PLEX Proinflammatory Panel 2 Rat Kit	K15059D	IFN-γ, IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, KC/GRO, TNF-α \| Rat
V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit	K15049D	IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, TNF-α \| Human

以上试剂盒优宁维现货，且提供专业的多因子外包服务。 Labex上海总部实验室正常运转，项目不停歇~
S-PLEX飞克级多因子检测试剂盒