过去二十年间，随着对肺癌相关研究的深入，化学治疗、靶向治疗、免疫治疗等治疗手段不断推陈出新，肺癌治疗水平得到了长足的进步。而肺癌患者的精准治疗离不开分子生物学及诊断技术的发展，液态活检作为新兴的检测技术在肺癌临床中的应用日趋成熟。
2019 年，美国癌症研究学会年会上的一项多中心研究表明，在检测晚期非小细胞肺癌基因突变方面，液体活检与指南推荐的标准组织活检相比，效果相当。
那么，关于液体活检，您知道多少呢？今天，笔者结合文献及相关指南，为您揭开液体活检的神秘面纱。
液态活检通过取样脑脊液、唾液、胸水、血液、腹水、尿液等对疾病进行诊断，能在一定程度上避免组织异质性对肿瘤分子分型的影响。目前，基于血液的液态活检是最主要的研究方向，主要检测血液中游离的循环肿瘤 DNA（ctDNA）、循环肿瘤细胞（CTC）和外泌体（Exosome）。
液体活检的简要流程，图源：inivata.com
带有肿瘤组织基因突变信息的 ctDNA 由肿瘤细胞释放到血液中，液体活检能够检测到包含点突变（SNV）、短片段插入缺失（Indel）、融合基因（Fusion）、拷贝数变异（CNV）等各类基因突变信息。CTC 通常包含更多的信息，如更完整的转录组、蛋白表达等，可以为临床提供有用的信息。肿瘤来源的外泌体参与到肿瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肿瘤的生长与侵袭，检测血液中的外泌体有助于了解更多肿瘤相关的信息。相比于组织活检，液态活检技术主要有具有无创、可重复性强、可实现早期诊断、进行动态监测、克服肿瘤异质性等优势。组织活检通常需要外科手段进行组织的获取，在获取组织的同时，可能存在出血、疼痛、感染、肿瘤播散等风险。另外，对于有些位置较为特殊或者不能耐受的患者，组织活检风险更大。相比于组织活检，液体活检最显而易见的优势就是无创，对位置要求低，可操作性强，痛苦小，患者接受度更高。组织活检主要依赖于影像学检查，在肿瘤早期或术后无瘤期间，影像学上无占位效应。但血液或其他体液中却可能存在一些肿瘤相关信息，例如肿瘤细胞释放的 DNA 片段或外泌体等，通过液体活检可以实现肿瘤早期筛查以及术后的复发风险预测等。液体活检标志物的半衰期很短，时效性较强。有研究表明 ctDNA 的半衰期仅不足 2 小时，这使得其可以精确反映肿瘤实时信息，达到指导用药、疗效和耐药监测等目的。有研究显示，液体活检的平均耗时为 9 天，组织活检为 15 天，这表明液体活检可以更早地为临床提供有效的信息。液体活检由于其灵活无创的特点，可重复性强，故可以实现对于复发、疗效或耐药的动态监测。影像学的提示往往会滞后，并且仅能显示肿瘤形态的变化，对于肿瘤内部如不同亚克隆间的消长无法分析，而且频繁的检测也有辐射带来的危害。由于肿瘤的异质性较强，不同个体的肿瘤、同一个体不同部位的肿瘤，同一部位的不同亚克隆组织，同一亚克隆的不同细胞，其中的遗传信息都可以是不尽相同的。传统的组织活检，是取病变组织的一部分做检测，存在局限性。液体活检取自全性循环 DNA 分子，理论上更全面，异质性偏差更低。如果结合组织活检和液体活检，则可进一步提高阳性率，使更多患者获益。例如液体活检可以检测肺癌 9 项经典基因突变信息，即：EGFR、ERBB2、ALK、MET、ROS1、BRAF、RET、NTRK 以及 KRAS 突变。亦可以检测其他瘤种、其他基因位点突变信息。通过采集患者血液样本，使用液体活检技术，可以帮助医生团队更好地分析患者的状况，评估复发风险，将无需化疗的患者和有必要化疗的患者加以区分，避免无效化疗给患者带来的伤害。在免疫治疗过程中，患者会存在小概率的「假进展」情况。借助液体活检技术，对患者用药后的体内微观变化进行分析评估，有利于帮助医生判断进展真假，避免错误的方案更迭。目前，常规癌症筛查中，主要针对的癌种有肺癌、乳腺癌、胃癌、结直肠癌等等。但一些特定癌种如胰腺癌、卵巢癌等，长期以来尚没有可靠的筛查方法，而液体活检或许能够弥补这个短板。液体活检技术主要包括数字 PCR（dPCR）、实时定量 PCR（qPCR）和二代测序（NGS）三种。其中，dPCR 通常用于单位点检测；qPCR 用于单基因多位点检测；NGS 则可同时检测大量基因的不同突变类型。dPCR 的灵敏度较高，在血液检查中有一定优势，但一次检测位点相对较少。qPCR 是目前最为成熟的液态活检技术，可进行准确的定量检测，有定量范围宽、特异性强、操作简单快速等优势。NGS 技术获得信息更加全面，可获得 ctDNA 中各个基因的突变信息，有助于进一步避免肿瘤异质性问题，全面分析肿瘤突变情况，同时在用药监测、微小残留病（MRD）监测、肿瘤突变负荷（TMB）监测等方面为临床提供更多的决策依据。不同类型检测技术各有优劣，临床医生可结合其特征灵活选择。
