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树突状细胞（DC）是骨髓免疫细胞的异质性群体，其特征在于吞噬细胞和抗原呈递能力。虽然DC被归类为先天免疫细胞，但它们负责启动适应性免疫反应，特别是幼稚T细胞的抗原特异性活化。活化的 DC 显示抗原摄取、迁移能力和在淋巴结中启动幼稚 T 细胞的能力增加。组织DC在调节自身免疫，过敏和食物不耐受中的作用，以及它们在疫苗接种中的关键功能，使DC成为过去十年中基础和转化研究的重点。 外周血中的DC细胞亚群
DC广泛分布于皮肤、气道、淋巴器官等部位,具有高度异质性,故不同组织中的DC有不同的名称。最近的研究结果表明，从外周血中分离出的原发性DC可用于癌症疫苗接种策略。
在外周血中的DC有三种：浆细胞样 DC （pDC） 和髓系 DC （mDC） 或常规 DC （cDC），根据表面标志物 CD1c（BDCA-1）和CD141（BDCA-3） 的表达可以进一步细分为两个亚群。
（1）pDC产生大量的I型IFN、IFN-α和IFN-β以响应病毒和细菌在toll样受体（TLR）上典型的结合核酸。TLR7识别单链RNA，TLR9识别CpG DNA。IFN对包括T细胞，NK细胞和mDC在内的几种免疫细胞具有多效性作用，这使得pDC成为病毒感染的关键反应者。然而，pDC的抗原摄取能力低于mDC，并且在稳态下，pDC可以诱导耐受性而不是免疫反应。人类pDC被定义为CD303（BDCA-2）+，CD304（BDCA-4 / Neuropilin-1）+，CD123+，CD4+，CD45RA+，CD141（BDCA-3）dim， CD1c （BDCA-1）-和 CD2–。它们缺乏谱系标志物（CD3，CD14，CD16，CD19，CD20，CD56）的表达，并且也不表达髓系标志物CD13、CD33和CD16及CD64等Fc受体。
（2）CD1c+ mDCs也称为cDC2或MDC2，在PBMC中占比0.6%。它们在TLR3或TLR8刺激时产生IL-12，这会导致TH1 CD4+ T细胞的极化和幼稚的CD8 T细胞的启动。CD1c（BDCA-1）抗原是CD1蛋白家族的成员，其在结构上与MHC I类蛋白相近，并可以介导非肽抗原向T细胞的呈递。
CD1c抗原由CD11chigh和CD123low 的DC上特异性表达。CD1c+ mDC 具有单核细胞形态，可表达髓系标志物，如 CD13 和 CD33以及Fc受体（如 CD32、CD64 和FcεRI）。小部分CD1c+表达CD14和CD11b。循环B细胞和从单核细胞或造血前体细胞离体产生的CD1a+ DC细胞也会呈现CD1c+。
CD141+ mDC有时也称为cDC1或MDC1，是非常罕见的血液DC亚群，占PBMC总量的不到0.05%。它们与CD1c+ mDC具有几个共同的功能性和表型特征，例如IL-12分泌和TLR8表达，但激活时也以IFN-λ分泌为特征。CD141+ mDC由于坏死受体Clec9a的表达，表现出来自死细胞抗原更好的交叉呈递。该受体和趋化因子（C基序）受体1（XCR1）是该亚群的排他性标记物。XCR1也由相应的小鼠亚群CD8α+ DC表示。
CD141+（BDCA-3）mDC是Clec9a+、 XCR1+、 CD11cdim、CD123–， CD1c（BDCA-1）–细胞，并且不表达谱系标记，如 CD3、CD14、CD16、CD19、CD20 或 CD56。它们表达髓系标志物，包括CD13和CD33，外观为单核细胞。与CD1c+ mDC相比，CD141+ mDC不表达CD2和Fc受体，如CD32，CD64和FcεRI。它们在toll样受体表达，细胞因子产生和T辅助细胞极化方面也有所不同。CD141（BDCA-3）抗原在血液中的CD1c+ mDC、pDC、单核细胞和粒细胞上的表达水平要低得多。 来自外周血的DC细胞亚群总结 | 细胞亚群 | 含量（PBMC） | Marker | 功能 | | 浆细胞样 DCs （pDCs） |
| CD303 （BDCA-2）， CD304 （BDCA-4/Neuropilin-1）， CD123， CD4， CD45RA， CD141 （BDCA-3） | 遇到病原体时，产生大量的IFN | | CD1c+ 髓样 DC（cDC2 或 MDC2）+ | 0.6%（PBMCs） | CD1c， CD11c， CD123， CD13， CD33， CD32， CD64， FcεRI， CD2， CD45RO， CD141一小部分也表示CD14和CD11b | 在TLR3或TLR8刺激下产生IL-12，导致TH1 CD4+ T细胞极化和幼稚CD8+ T细胞的启动++ | | CD141+ 髓系 DC（cDC1 或 MDC1）+ | 0.05% （PBMCs） | Clec9a， XCR1， CD11c， CD13， CD33 | IL-12 和 IFN-λ 分泌细胞抗原的交叉呈递 |
从外周血中分离DC
从外周血中分离DCs需要前期样品处理，可以通过密度梯度离心分离外周血单核细胞（PBMC）。DCs是外周血中低频细胞群。因此需要使用高纯度和高回收率的分选方法将DC分离出来。 从 PBMC 中分选各种DC亚群的试剂 外周血DCs的流式检测标志物总结： | Mo-DCs | pDCs | DC1c+ cDCs | CD141+ cDCs | | HLA-DR+ | HLA-DR+ | HLA-DR+ | HLA-DR+ | | CD14– | CD303 (BDCA-2)+ | CD172 (SIRP-α)+ | CD141 (BDCA-3)+ | | CD11b+ | CD304 (BDCA-4)+ | CD1c (BDCA-1)+ | CLEC9a (DNGR-1)+ | | CD209 (DC-SIGN)high | CD123 (IL-3R)high | CD11b+ | XCR1+ | | CD83– | ILT7+ | CD123 (IL-3R)int | CD123 (IL-3R)– |
| CD11clow | CD11chigh | CD11c+ |
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| CD11blow |
外周血DC的细胞培养
在培养DC细胞时因为它们不会扩散而且外周血中的含量很少，因此在培养的过程中保证细胞的高活力非常重要，优宁维提供各种细胞培养的产品。
用于外周血DC刺激的部分产品清单如下：
用于外周血DC刺激的部分产品清单如下： | 货号 | 名称 | | 215-GM | Recombinant Human GM-CSF Protein | | 4287 | Poly(I:C) （TLR3 agonist） |
体外培养使用GM-CSF和IL-4从外周血单核细胞中产生，以在5-7天内驱动分化。这些单核细胞衍生的DC（Mo-DC）具有未成熟DC的特征，可以通过在微生物，促炎或T细胞衍生的刺激下培养它们来成熟。因为DC细胞的各种功能，它基础和转化研究的也是越来越受到重视，在各方面的应用中有巨大的潜能。
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