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今天主要介绍的是利用RNAi（RNA干扰，RNA interference）技术来实现对乙肝病毒杀灭的在研乙肝新药信息。 RNAi技术在近20年前被发现，并于2006年获得诺贝尔生理学或医学奖。今年9月，Alnylam 公司宣布用于多发神经病变性遗传性ATTR型淀粉样变治疗的在研RNAi新药patisiran在APOLLO Phase 3期临床中达到首要研究终点以及所有的次要研究终点。意味着首款RNAi疗法将有望在近期获批上市！ RNAi是双链RNA（dsRNA）特异性的结合到与之序列互补的mRNA上，导致mRNA降解，从而介导的转录水平基因表达抑制。即利用RNAi原理，在体外利用化学或酶促合成siRNA，也可构建在体内合成siRNA的质粒或病毒表达载体，然后利用传统微注射磷酸钙法、电穿孔转染法、脂质体介导转染等方法转染细胞从而致使靶基因沉默。 目前已公开的利用 RNAi 技术治疗慢乙肝的在研乙肝药物主要有： Arbutus 公司的 ARB-1467、ARB-1740、ARB-880、ARB-1820、ARB-168786； Arrowhead 公司的 ARC-520、ARC-521、ARO-HBV； Arcturus 跟 Janssen 联合研发的 Lunar-HBV； Benitec 公司的BB-101、BB-102、Hepbarna (BB-HB-331，现已更名为BB-103)； Alnylam公司的 ALN-HBV； Roche 公司的 RG6004 (HBV LNA)等。 一、Arbutus 公司的 ARB-1467 等 ARB-1467 包含三种针对所有四种HBV转录本的RNAi触发因子，临床前研究显示其能减少所有病毒抗原水平以及 cccDNA 和 HBV DNA。目前该药已在进行 Phase II 期临床研究，以下是该药已公布的部分Phase II 期临床结果，
在此次的 2017 AASLD 年会上 Arbutus 研究人员公布了 ARB-1467 用于 HBeAg 阳性以及病毒学已受控制慢乙肝患者的多剂量 phase 2a 期临床研究结果，此次公布的结果主要是观察对HBcrAg 和HBV RNA这两种标志物作用效果（详情请看AASLD2017：在研乙肝新药ARB-1467 Phase 2a期临床部分结果公布）。此不赘述。 另在此次AASLD会议上还公布了该药在HBeAg阳性但病毒已经受抑制的慢乙肝患者中的Phase 2a期药代动力学和药物暴露结果（编号：42）。该研究是 ARB-001467-002 研究，为一项单盲、安慰剂对照、多剂量研究，受试者为无肝硬化的病毒已获得抑制的慢乙肝患者，主要评估12周的 ARB-1467 安全性和有效性。 24名使用核苷类似物稳定控制病毒的慢乙肝患者分为3组队列，每组队列用药患者和安慰剂患者3:1比例随机分配：Cohort 1, HBeAg 阴性 0.2mg/kg（ ARB-1467用药剂量，下同）； Cohort2, HBeAg阴性 at 0.4mg/kg； Cohort 3, HBeAg阳性 0.4mg/kg。患者在3个月内接受 ARB-1467 静脉注射，并进行安全性，药代动力学（PK）和 HBV 标志物监测。 分别在第1次用药和第2次或第3次注射后168小时搜集血液样本进行PK分析。血浆浓度通过验证的ELISA获得。 通过队列和剂量数量得出非区室PK和总结统计数据。以浓度 - 时间曲线下的最大浓度（Cmax）和面积（AUC（0-t））与HBsAg的下降关系进行图解。 每个siRNA的PK在输注结束时用C max表征，用药后6-8小时浓度显著下降; 次峰出现在24-36小时后是常见的。每个siRNA显示可比较的血浆浓度，与脂质纳米颗粒（LNP）内的等摩尔siRNA载量一致。第1剂用药（表）显示了一种（D6-11）siRNA的代表性PK。血浆中siRNA的积累可以忽略不计。Cmax和AUC（0-t）值适度大于剂量比例。HBeAg +和HBeAg-对象之间的PK没有明显的差异。HBeAg阴性受试者0.4mg / kg剂量用药要比 0.2mg / kg的平均暴露量和平均HBsAg下降较大，但个体暴露与应答之间没有明显的趋势。 上述表明，给予ARB-1467后的siRNA PK适度大于0.2至0.4mg / kg剂量的。 血浆PK不能很好地解释个体患者应答的差异。影响应答的患者和疾病特异性因素需要进一步评估。 另外， Arbutus 还在此次会议上公布了他们发现的一类新型的HBV RNA去稳定剂（编号：923）。其表现出能对HBsAg和HBeAg产生有效抑制，减少病毒复制，并且具有良好的体外抗病毒活性。此外，它们与其它抗HBV药物联合用药效果良好。值得注意的是，这几种抑制剂在免疫活性的AAV小鼠模型中显示优异的ADME / PK谱并显着抑制HBV复制和抗原血症。这些化合物像小分子RNAi药物一样起作用。 研究人员在不同的细胞培养系统中进行新型小分子化合物的体外抗病毒效力，细胞毒性和联合用药研究，并使用ELISA，qPCR和Northern / Southern印迹分析进行定量检测。利用携带基因型D的1.2倍长度基因组的AAV感染的慢性HBV免疫活性小鼠模型来表征口服HBV RNA去稳定剂的体内抗HBV活性。 研究人员在不同的细胞培养系统中进行新型小分子化合物的体外抗病毒效力，细胞毒性和联合用药研究，并使用ELISA，qPCR和Northern / Southern印迹分析进行定量检测。利用携带基因型D的1.2倍长度基因组的AAV感染的慢性HBV免疫活性小鼠模型来表征口服HBV RNA去稳定剂的体内抗HBV活性。 鉴定出一种能使 HBV pgRNA 和 sAg RNA 去稳定的小分子序列。在HepG2.2.15细胞中，这些抑制剂降低了HBV sAg和eAg，并且具有3-30nM的EC 50值的病毒粒子产生。它们在多种细胞系中活跃，包括HBV感染的PHH细胞。这类抑制剂对所有测试的基因型具有活性，并显示出与人血清最低程度影响的HepG2.2.15细胞相似的EC50值。在体外，这些抑制剂表现出了1000至超过17,000范围的治疗指数（CC50 / EC50），并在面向每个panel 中的 10个病毒（RNA和DNA）时无活性。这些抑制剂与LNP siRNA药物 ARB-1467或ARB-1740的联合研究在组织培养中显示出加成效应。这些化合物中的几种在人肝微粒体中稳定，并且在小鼠，大鼠和狗中表现出良好的口服生物利用度，其中24小时的肝脏浓度和血浆浓度预测在人类中可以每天给药一次。在AAV模型中，以0.1，0.3和1mg / kg的BID口服治疗1周后，其中一种新型HBV RNA去稳定剂，以剂量依赖性方式导致高达1.4log10的血清HBsAg降低。 ARB-1740 由于临床表现效果不及 ARB-1467 ，因此，今年早些时候Arbutus公司宣布终止该药物的研发，而关于ARB-880、ARB-1820、ARB-168786的具体消息目前公布不多，略晓薛会继续追踪。 二、Arrowhead 公司的 ARC-520、ARC-521、ARO-HBV Arrowhead 公司的 ARC-520、ARC-521此前的临床表现也非常抢眼，但由于种种原因，公司已于去年宣布终止了这两款药物的临床研究，而利用在这两款药物研究获得的经验进行更新一款药物ARO-HBV的研究。关于 Arrowhead 公司在研乙肝新药ARO-HBV的消息此前 Arrowhead 已经公布了一些，ARO-HBV是 Arrowhead 用于慢乙肝治疗的第三代皮下给药临床候产品，在啮齿动物模型中实现降低99.9%的乙肝表面抗原(HBsAg)，e抗原 (HBeAg)和HBV DNA。在非GLP大鼠探索性毒理学研究中，高达 300 mg/kg（人类预期剂量的75-100倍）未观察到临床化学物质的变化，并且没有组织病理学表明具有器官毒性。Arrowhead 计划待GLP毒理学研究完成后在2018年Q2期间提交CTA，以开始临床研究。而在本次AASLD年会上并没有相关信息公布。 三、Arcturus 跟 Janssen 联合研发的 Lunar-HBV 此次年会上也没有LUNAR-HBV相关的新消息公布。据此前的消息了解到，LUNAR-HBV是一种3个UNA寡聚物的组合，靶向所有HBV转录物并涵盖所有的公开HBV序列，是迄今为止报道的单一药剂中HBV基因型覆盖最全面的。LUNAR-HBV在HBV感染的人肝细胞和两种HBV感染的小鼠模型中显示出有效的抗HBV活性。3个UNA寡聚物的组合也使病毒出现耐药性的可能性最小化。 在HBV荧光素酶报道基因分析中，LUNAR-HBV组合中的3个UNA寡聚体的IC 50值分别是63pM、26pM和7pM。转染15nM LUNAR-HBV在HBV感染的原发性人肝细胞中能降低80％的HBsAg的分泌水平。在一个AAV-HBV小鼠模型中，与基线水平相比，LUNAR-HBV降低了血清HBsAg高达3.0log10、血清HBV DNA达3.0log10、血清HBeAg达2.0log10。在HBV感染的PXB小鼠中，LUNAR-HBV降低了血清HBsAg高达1.7log10、血清HBV DNA达1.2log10、血清HBeAg达1.1log10。 基于其有效地降低HBsAg和其他病毒产物，以及重新激活抗病毒免疫的潜力，LUNAR-HBV有可能成为新一代HBV疗法的基石。 四、Benitec 公司的BB-101、BB-102、Hepbarna (BB-HB-331，现已更名为BB-103) 在此次年会上也没有该公司上述几款药物的信息公布。据此前公开的信息显示，BB-103 是一种使用RNA干扰（RNAi）技术设计用于慢乙肝治疗的重组腺相关病毒8型(AAV8)载体。该载体使用三个野生型pol III启动子来驱动三个短发夹RNA的表达，每个嵌入在miRNA主链内，以同时靶向HBV病毒RNA上的核心，S抗原和X蛋白区域中的三个保守序列。 在 PXB小鼠实验中，使用 BB-101, BB-102 或 BB-103 进行治疗或联合每周两次的 PegIFN，为期90天，或每日使用恩替卡韦。
五、Alnylam公司的 ALN-HBV 本次年会上也没有ALN-HBV的相关信息公布，不过，据此前消息显示，该药已开始Phase 1/2期临床试验。1/2期临床试验最初将在健康志愿者中进行，然后，在慢性乙型肝炎患者中进行。 六、Roche 公司的 RG6004 (HBV LNA) 目前暂未查到HBV LNA相关的信息，此次年会上也没有公开消息公布。 其他研究消息将陆续公布，敬请期待...... 最后做一个声明：本文所有内容均来自转载或者已发表的相关研究摘要，其中提到的药物均为临床试验用药，有些并未获得批准大规模用于临床使用，或者被批准用于相应的临床适应症。绝对不建议患者自行配制相关药物进行自身用药试验，凡由此造成的任何后果均由患者本人承担，本人不承担任何责任。 注:转载原创文章务必注明“来源:HeparSpace 微信公众号”，否则小心作者追到你家门口(⊙o⊙)哦！ |
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