1.微生物培养基的成分：无、无机盐、碳源、氮源、生长因子（某些需要但自身不能合成的小分分子有机物，如维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等）。2.细菌培养基：LB培养基；植物组织培养的培养基：MS培养基；酵母菌：马铃薯蔗糖培养基。（1）按物理性质分：固体培养基：添加固化剂琼脂或琼脂糖；液体培养基：用于微生物扩大培养；（2）按成份分：合成培养基：用于可重复性强的科研工作；天然培养基；因成本低而广泛用于规模生产；半合成培养基：既有天然成份，同时也添加人工配制的成份。（3）按最后形状分：固体平板培养基：用于微生物分离形成单菌落或用于微生物计数；斜面培养基：用于分离纯后的菌种培养并保存菌种。4.琼脂与琼脂糖：前者含有少量含氮杂质；后者不含有含氮杂质，用于尿素培养基的配制，以确保尿素为唯一氮源。5.无菌操作：操作者无菌（消毒的实验服、消毒手套、手消毒）；操作空间无菌（无菌实验室、超净台）；操作器具无菌（灭菌的试管、烧瓶、培养皿等）；灭菌的培养基；操作过程无菌（酒精灯火焰旁等）。（1）高压蒸汽灭菌法：①121℃，1Kg/cm2，15-20min；最常用；②112℃，500g/cm2，30min；针对易碳化的葡萄糖等物质灭菌；（2）G6玻璃砂漏斗过滤除菌；对尿素、葡萄糖等灭菌。注意：病毒能通过G6玻璃砂漏斗。（3）灼烧灭菌：针对接种针（环）、瓶口、试管口等，使微生物碳化。注意：涂布器在酒精灯上灼烧主要是为了将残留的酒精燃烧掉，避免残留酒精将菌液中的菌种杀死。7.消毒方法：只能杀死部分微生物，不能杀死孢子和芽孢。（1）物理方法：紫外线照射；煮沸；巴斯德消毒法（60-80℃，可保持营养物质的口感、风味）；（2）化学方法：75%酒精（用于手、桌面、皮肤等）；10%次氯酸钠（用于外植体消毒）；0.1%氯化汞（可替代次氯酸钠用于外植体消毒）；高锰酸钾（用于水果等消毒）；8.防腐：根据微生物生长繁殖特点，用物化因素抑制微生物生长繁殖的措施，如用除氧剂抑制需氧生物繁殖，采用低温、盐腌、糖渍、干燥等措施保存食品。9.棉塞（用于封试管、烧瓶等）用棉：用普通棉而不用脱脂棉，因为脱脂棉易吸水导致污染。10.自然接种：食品等因微生物自然落入而导致变质。11.划线法能形成单菌落的原因：通过划线使微生物菌种逐渐稀释，最后可由单个微生物形成单菌落。注意：单菌落也不一定只是单个微生物形成，也可能两个或多个形成，因此稀释涂布法计数的数值理论上小于或等于实际的微生物数值。12.提高微生物计数准确性的方法：①计数前将菌液摇匀；②多次计数，取平均值。13.可以在尿素（唯一氮源）培养基上生长的微生物：以尿素为氮源的微生物；自身固氮微生物。14.酵母菌：出芽生殖或裂殖的单细胞、真核微生物，约500多种。15.带菌字的生物：细菌：原核生物，名字中多带“螺”、“杆”、“弧”、“球”等字眼。霉菌、酵母菌：真核生物。16.影响发酵食品风味的因素：菌种类型及其代谢特点、种间关系等导致营养物质种类及含量差异。（2）代谢产物：根据产物本身的理化性质采用不同方法。①萃取发酵：利用产物在两种不互溶的溶剂中溶解度不同而提取；②真空发酵：对发酵罐减压使产物挥发而分离；③吸附发酵：使产物特异性地吸附在某种吸附剂表面而分离，如离子交换树脂。18.外植体消毒程序：洗涤灵稀释液浸泡2min→流水冲洗→75%酒精30s→流水冲洗→10%次氯酸钠10min或0.1%氯化汞5-7min→无菌水冲洗。19.植物克隆的两个途径：器官发生途径（有芽、根生成即是）；体细胞胚发生途径（过程中有胚生成就是）。20.获取原生质体的方法：在0.5-0.6mol/L的苷露醇（或一定浓度的蔗糖）中，用纤维素酶和果胶酶处理，除去细胞壁。需用较高渗透压的原因：使细胞处于微弱的质壁分离状态，有利于完整的原生质体的释放，防止原生质体破坏。22.利用杂种细胞培育新植物体的原理：植物细胞的全能性。23.植物克隆的基础技术：植物组织培养；动物克隆的基础技术：动物细胞培养。24.动物克隆要利用到的生物技术：核移植、胚胎体外培养、胚胎移植。25.CO2培养箱：提供恒定的5%的CO2浓度，使之与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，调节pH的相对稳定（7.2-7.4）。26.动物细胞培养流程：低龄动物或胚胎的组织→剪切（机械分割）、酶（胰蛋白酶或胶原蛋白酶）→细胞悬浮液→原代培养→传代培养（1）细胞系是泛指能传代培养的细胞。依据是否能连续传代培养分为有限细胞系和无限细胞系，后者发生了转化即遗传物质发生了改变的细胞系，具有不死性。不是所有的无限细胞系都是恶性的，有的无限细胞系虽然获得不死性，但其保留了接触抑制且不致癌，因此属于良性而不是恶性的。
（2）细胞株：从细胞系中纯化出来的，具有某些特殊性质的细胞。特殊性质：如特定的染色体组型；病毒敏感性或抗性及其他生化特性等。也可分为有限细胞株和无限细胞株。（3）细胞克隆（克隆培养）：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之成为一个细胞群的技术。基本要求：必须来自于一个而不是多个细胞。28.动物体细胞不能表现全能性的原因：因基因选择性表达，在细胞质中存在抑制核基因表达的调控蛋白。29.动物成熟体细胞成功克隆可以证明：①高度分化的细胞经过一定的技术处理，可回复到类似受精卵的功能，表现出全能性；②在胚胎和个体发育中，细胞质具有调控细胞核发育的作用。30.克隆动物培育过程中，在重组卵细胞开始第三次分裂时，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换，因此核DNA被重新编排，开始表达自己的基因。（也就是开始三次分裂只是复制了DNA，并没有基因的表达）31.促进细胞融合的方法：①物理方法：电融合法（电刺激、电脉冲）、激光融合；②化学方法：聚乙二醇；③生物方法：灭活的病毒。能促进融合的原因：使细胞膜发生一定程度的损伤，导致分子重排。32.单克隆抗体的特点：纯度高，可大量制备，特异性强，灵敏度高。33.多克隆抗体的特点：纯度低（多种抗体的混合物），特异性弱，灵敏度低。34.生物导弹：将药物与单抗连接，使药物特异性作用于目标细胞，从而减小或不对正常细胞造成损伤。35.克隆动物：通过将体细胞核移植给去核卵细胞形成重组细胞，再诱导其发育成完整个体。属于无性生殖，需用到核移植技术、胚胎体外培养技术、胚胎移植技术。36.试管动物：通过人工取卵（需成熟培养）、人工获取精液（需获能处理，注意：获能不是获取能量），在体外试管或培养皿中完成受精，并将受精卵在体外培养到早期囊胚，再移植给胚胎受体完成孕育，所生出的动物即试管动物。37.具有全能性的高等动物细胞：受精卵、2-8胞期的早期胚胎细胞。38.超数排卵：人为注射外源促性腺激素，促使卵巢排出较正常情况下更多的成熟卵细胞的方法。39.采卵技术：包括手术采卵（冲洗输卵管采卵）和非手术采卵（子宫冲卵）。（选三P90）40.胚胎移植的时期：不同动物胚胎移植的时期不同。牛、羊一般在16胞阶段（桑葚胚）或囊胚阶段，小鼠和家兔可在更早阶段移植，人可在4细胞阶段移植。41.胚胎分割方法：不同阶段可采用不同方法。2-8细胞期，可用酶（胰蛋白酶）分割，使其变成单个细胞，因为每个细胞都有全能性。囊胚则不能用酶分割，只能用机械分割法将其切成均等几份，丙将其培养到早期囊胚后再移植。通过胚胎分割可获得基因型相同的同卵双胎或多胎。42.试管动物必须胚胎移植的原因：胚胎发育不同阶段所需营养异常复杂，目前人工尚不能提供满足各阶段营养需求的培养液。44.基因工程的理论基础：DNA是遗传物质；遗传信息的传递和表达机制（中心法则）；生物共用一套遗传密码。46.基因工程的工具：限制酶（限制性内切核酸酶）、DNA连接酶、基因载体。注意：工具酶只是前二者。47.DNA连接酶：连接的是DNA片段。DNA聚合酶：是将游离的脱氧核苷酸连接成DNA链。前者用于基因工程，后者用于DNA复制过程。48.E.coli DNA连接酶：只能连接黏性末端；T4 DNA 连接酶：既能连接黏性末端，也可连接平末端。49.基因载体的种类：最常用的是大肠杆菌的质粒，动、植物、细菌病毒（噬菌体）也可以作载体。50.《DNA的粗提取和鉴定》实验中的试剂及其作用：（1）2 mol/L的NaCl溶液：提取DNA的溶剂；（2）95%冷酒精：沉淀DNA（DNA不溶解于其中）。（4）SDS（十二烷基硫酸钠）：使核蛋白变性并与DNA分离；（5）EDTA（乙二胺四乙酸二钠）：抑制DNA酶活性，防止DNA被酶水解；（6）Tris（三羟甲基氨基甲烷）：缓冲液，调pH；（7）二苯胺：鉴定DNA（在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈蓝色）。（1）第一步：获取目的基因：方法：①化学合成法（已经基因序列）；②从基因文库中获取；③PCR扩增目的基因。（2）第二步：利用表达载体构建重组DNA分子。要用到限制酶和DNA连接酶和载体。（3）第三步：将目的基因导入受体细胞。常见主要方法：①感受态细胞转化法（用于细菌）；②农杆菌转化法（用于植物）；③显微注射（用于动物或植物原生质体）。（4）第四步：检测目的基因及其表达产物。检测方法：①检测基因：PCR和核酸分子杂交；②检测产物：抗体-抗原分子杂交。52.核酸分子杂交：将待检的DNA变性成单链并固定在硝酸纤维膜上，然后加入探针（用荧光或放射性元素标记的目的基因单链），如待检样品DNA与探针能互补，就会形成双链并粘附在硝酸纤维膜上，漂洗除去未互补结合的探针后，在膜上便具有放射性或荧光，即可说明待检DNA中含有目的基因。53.基因工程成功的标准（直接证据）：目的基因在受体细胞中稳定、高效地表达。54.PCR扩增所需引物的要求：只能与目的基因3`端互补（高度特异性）；自身不能具有互补的区段；两引物间不能互补。55.复制（扩增）载体：目的是将目的基因大量扩增。须有复制起点，但可不含有启动子、终止子。56.表达载体：目的是获取目的基因对应的产物。表达载体必须含有启动子、终止子、复制起点、标记基因等。57.PCR的原料：4种脱氧核苷三磷酸，即dNTP，N代表A、T、G、C四种碱基。58.PCR三步骤：①变性：DNA在高温（90-95℃）下氢键断裂，解旋形成单链；②退火：温度降低为50-60℃，利于两个引物与各自互补的单链结合；③延伸（约72℃）：以DNA两条单链为模板，以dNTP为原料，在耐高温的DNA聚合酶作用下形成新的子链，并形成两个子代DNA分子。59.PCR微量离心管中的物质：含目的基因的DNA片段（核酸样品）、dNTP、两种引物、缓冲液、耐高温的DNA聚合酶等。（注意：不需要解旋酶！）60.影响细菌转化效率的因素（将目的基因导入受体细菌）：重组质粒的浓度和纯度、细菌的状态、细菌的密度等。61.基因工程技术的应用：①PCR-核酸分子杂交——基因诊断；②向患者体内导入正常基因——基因治疗；注意：基因治疗不是将缺陷基因修复！③利用转基因生物生产基因工程药物；④基因敲除——制作模型动物；⑤DNA测序——法医鉴定；⑥基因工程——培育转基因动物、植物、微生物新品种。62.蛋白质工程:通过设计和改造编码蛋白质的基因获得特定功能的蛋白质。注意：并不是直接对蛋白质分子进行人为的改造，而是对基因进行定向的改造达到改造蛋白质的目的。63.转基因作物环境安全性的主要体现：①转基因作物具有比本地物种更强的竞争优势和繁殖能力，导致“生态入侵”，影响原有生态平衡；②通过近缘植物发生基因漂移，使基因扩散到环境中，引起生态危机。（选三P138）64.对于转基因生物，建立合理的风险评估原则是科学管理的基础。（选三P139）65.我国对于克隆的立场、态度：禁止生殖性克隆，支持治疗性克隆。66.生命伦理的四大原则：自主（尊重人的尊严、价值）、不伤害（对实验对象）、善行（为了健康和幸福）和公正（分配、分享、承担风险）。67.生物武器：指有意识地利用微生物、毒素、昆虫侵袭敌人的军队、人口、农作物或牲畜等目标，以达到战争目的的一类武器。最大特点：有传染性。生物武器防护：主要包括预警体系、防控体系和疫苗库。
|
