养细胞的人往往谈“污”色变,明明已经小心谨慎,明明已经步步为营,恨不得戴着显微镜操作,发现污染则前功尽弃。除了在操作过程中保证严格无菌以外,做好培养器具的清洁以及预防培养基污染更是至关重要。 如何判断细胞污染? 1、培养基浑浊,可以初步判断是细菌污染。
2、培养基不浑浊,有丝状物质可以初步判断是真菌污染。 3、培养基不浑浊、没有丝状物质,但是细胞状态变差,生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,是细胞凋亡坏死,释放出大量碎片,看起来就像黑胶虫,细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡。 ![]() 培养环境大扫除 细胞房、培养箱、水盘、水浴锅...除了是细胞生长的温床,同时也是孕育杂菌的温床,因此养细胞之前,我们要对它们进行彻彻底底的大扫除!
除菌案例: 抑制枯草芽孢杆菌 加入除菌试剂后,可以显著抑制枯草芽孢杆菌的生长 抑制霉菌 接种 106 cfu/mL的霉菌至霉菌培养基上,待菌长满后,实验组1、2分别喷洒水浴锅抑菌剂(abs9371)、培养箱除菌剂(abs9372)、细胞房除菌剂(abs9373)、水盘抑菌剂(abs9374),实验组3喷洒无菌水。
与常见清洁试剂对比:
保卫细胞,消灭支原体 比杂菌污染更棘手的则是支原体污染,它也是是细胞培养领域的一个世界性问题,世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。支原体的直径约为 0.1-0.3μm,这也就意味着它们可以透过常见的滤膜(0.22-0.45μm),因此常规的无菌过滤方法不能将其去除,而常用的抗生素也对支原体无效。
当支原体污染发生后,它们不会使细胞死亡,甚至能与细胞长期共存,也不会使培养基发生浑浊,细胞外观上看起来也不会有明显变化,实际上却埋下了“隐疾”。支原体在潜移默化中悄悄引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长,竞争营养,分泌有害代谢产物,迅速降低培养液中的葡萄糖,形成酸从而改变Ph值;消耗精氨酸、抑制蛋白合成、细胞分裂减慢、停止生长等,最终影响实验结果。 Absin支原体清除试剂&预防试剂
清除猪IPEC-J2细胞中的支原体 支原体清除剂(abs9375)处理猪IPEC-J2细胞3天后,采用Hocest33342染色法对处理前后的细胞进行染色。 Absin支原体清除试剂与抗生素类清除试剂对比 400bp左右有条带的为支原体污染。下图是被支原体污染后经支原体清除剂(abs9375)(9、10 条带)和抗生素类试剂(11、12)处理后效果的对比。 |
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