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提到细胞生物学实验，最基础的恐怕就是seeding cells了吧，把用于实验的细胞铺的均匀且密度适宜，不仅在看起来赏心悦目，更是决定了实验结果的稳定性。 从10cm dish到96孔板，难度逐步增加~ ~ ~ 在这里我以293T细胞为例。 一、 均匀接种通关手册 第1关： 10cm dish 通关秘籍：dish紧贴，紧贴你的实验台；前前后后，左左右右晃起来； 前后前后前后前后左右左右左右 10cm dish可以晃得慢一点，想象你的手里dish中不是培养基，而是，海浪！~~~~~~ 轻柔且缓慢，10次重复即可。 记得显微镜下观察哦，推荐4x物镜~~~，不满意就再加一个循环。 第2关： 6cm dish 通关秘籍：参照10cm dish，速度加1挡；比如说之前你一个前后左右要2s，现在换成1s。 记得显微镜下观察哦，推荐4x物镜~~~，不满意就再加一个循环。 第3关： 3.5cm dish/6孔板 通关秘籍：3.5cm dish和6孔板的一个孔在规格上是一样的，可以将前后左右的幅度再大一些，比如6cm dish你的一个前后跨度5cm，现在换成10cm，速度加档相比6cm dish加0.5档。 记得显微镜下观察哦，推荐4x物镜~~~，不满意就再加一个循环。 第4关： 12孔板-24孔板 通关秘籍： 再剧烈一点 第5关：48孔板 通关秘籍：一般到48孔板就不推荐上下左右了，不是说这种方法不行，而是不太好操作，得稍微老一点的手。 推荐使用一下两种方法中的一个或联合使用： 方法一：轻拍孔板边缘！加入200-500μL左右细胞悬液，左手或右手水平持板，沿着4条边 依次轻拍数下，不要拘泥于拍顺序和位置，以镜下均匀为准。 方法二：预加培养基，再滴加细胞悬液！若是你想要每孔盛500μL media，你可以先放4/5的media，也就是400μL，再把你要的细胞悬浮成100μL，使用移液枪，垂直于平板缓慢滴加到板中央即可，只要够垂直和居中，一般不需要摇晃或者拍板就可以非常均匀。 第6关： 96孔板 到96孔不建议摇晃和拍板，不是说不行，难度比较大了。 建议使用48孔板（第5关）的方法二，把各个体积缩小一半，也就是50μL，滴加到200μL中，若是滴不出，也可以使液滴接触培养基平面使两者汇合。 二、接种数目通关手册 比6cm dish小的孔板，都可以预先添加一定体积的PBS或培养基湿润孔板，以使其变得亲水。 接种数目以293T细胞为例： 10cm：300-500万；相当于10cm dish 80%汇合时1:4或1:5传代的效果； 6 cm：120-200万；其底面积为10cm的1/2.5； 3.5cm/6孔板：60-80万 12孔板：20-30万 24孔板：10-15万 48孔板：5-8万 96孔板：3-5万 顺便提一句：我推荐的密度很适合做转染哦！转染基本知识请移步我之前的帖子：HEK 293T细胞使用经验（转染、包病毒等） 好的，以上是我目前能想到的一些小知识，有小伙伴提问的话我再加以补充哈！ |
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