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食品微生物检测 菌落总数与大肠菌群数测定  主要内容 菌落总数测定 大肠菌群测定 MPN法原理(拓展内容) 菌落总数的定义: 食品检样经过处理，在一定条件下 ( 如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每m(g)检样中形成的微生物菌落总数。 适用范围: 在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数测定。 卫生学意义: ●用来判断食品本身的新鲜程度 ●判定食品的卫生质量--加工、贮存运输过程中是否受到污染 ●必须配合大肠菌群的检验和其他病原菌项目的检验，才能作出比较全面准确的评定 实验原理： 不同稀释度的样品，营养琼脂培养基，36℃，48h(水产品30℃，72h) 实验器材与试剂： 样品，无菌生理盐水，平板计数琼脂培养基，1mL吸管，培养皿
倾注培养
培养结果 VIP免费文档
菌落计数： 肉眼观察，可用放大镜，可标记 必要时分区计数，菌落成片者作废
注意事项： 1.无菌操作 2.标记 3.何时更换吸管 4.吸吹混匀 5.琼脂培养基保温 大肠菌群定义: 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性 无芽胞杆菌。 检测意义: 该菌主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推 断食品中肠道致病菌污染的可能。 检测方法: 第一法大肠菌群MPN计数法 第二法大肠菌群平板计数法 实验原理： 36℃，48h，产气(小倒管协助判断) 三步法:初发酵、复发酵 实验器材及试剂: 样品、无菌生理盐水、LST肉汤，BGLB肉汤、1mL吸管、10mL吸管、试管、小倒管
☆初发酵 器材与试剂 样品、225ml无菌生理盐水、9ml无菌生理盐水、双料LST肉汤，单料LST肉汤，10mL吸管、1mL吸管、吸球等 实验步骤： 1、吸取样品的方法（如图）
加注样品
2、初发酵结果
右边为阳性结果，小倒管内有气体产生 3、复发酵 (1)选取产气试管 (2)接种至10mIBGLB肉汤中. (3)培养: 36℃，48h (4)观察指标:若产气则报告大肠菌群阳性。 4、分离培养 器材与试剂 初发酵结果(4只发酵管)、酒精灯、接种环、伊红美兰平板培养基 (1)制备伊红美蓝平板: 45℃，无菌，倾注，15mL (2)选产酸产气的发酵管 (3)接种至伊红美蓝平板分区划线法 (4)培养:36°C，48h (5)菌落特征: 深紫黑色、有金属光泽紫黑色、无或略有金属光泽淡紫红色、中心颜色深
典型菌落 (6)革兰染色、镜检:选特征菌落
※分区划线法的操作要点： 1.划下一个区前必须灭菌接种环 2.划线时接种环同平板呈30-40°角 3.每次划线应该压到上一个区域的2-3条线 4.用接种环的“面”而不是“弧”在平板上滑动 1、器材与试剂 结晶紫、卢戈碘液、95%乙醇、酸性复红、生理盐水、酒精灯、载玻片、滤纸
2、步骤： （1）涂片:接种环，挑取菌落,生理盐水一滴，涂匀 （2）热固定:通过火焰若干次 （3）初染:结晶紫一滴，1min,水洗 （4）媒染:卢戈碘液一滴，1min，水洗 （5）脱色: 95%乙醇，30s或至无色为止 （6）复染:复红一滴，30s
涂片
热固定
初染
媒染
脱色
复染 (1)选取鉴定为无芽孢G杆菌的菌落1-3个 (2)接种至10ml乳糖蛋白胨培养液 (3)培养: 37C，24h (4)观察指标:产酸，产汽
※大肠菌群检测的操作要点：: 1.无菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.显微镜保养 5.液体接种 MPN法( Most Probable Number Method ) 目的:对某种细菌进行选择性计数 核心思想:泊松分布 实施方法:多次稀释直至无菌，每个稀释度分别接种若干培养管，根据阳性管数估算MPN值 因为细菌在样本内的分布是随机的，所以检测细菌时，可按概率理论计算菌数。 1.细菌进入发酵管的概率近似服从泊松分布:
X:细菌浓度，k:进入发酵管的细菌数 2.若在n管发酵中，令接种水样量为Vi，阳性管数为Pi， 阴性管数为Qi,则该检验结果发生的概率为:
其中C为常系数
V为总水样量，x为细茵个数 3.当y(x) >max，X→MPN 4.由于y(x)为单极值函数，令dy/dx=0,即
5.解此方程，得x=MPN 6.该方程为超越方程，一般采用数值法求近似解 7.日常实验时采用查表法推算MPN值。
文章参考： 1.国标菌落总数、大肠菌群等； 2.图片来源网络及微信好友分享； 提醒：小编整理，文章内容用于学习和交流，仅供参考！如文章涉及侵权，请联系处理。  |
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