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说到结核病相信大家都不陌生，它是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及许多脏器，以肺部结核感染最为常见。排菌者为其重要的传染源，通过把含有结核菌的微粒排到空气中进行飞沫传播。 近年来，很多医院采用结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）对结核感染进行筛查。那么T-SPOT.TB的检测原理是什么？T-SPOT检测性能指标如何？有什么临床意义？诸如此类的问题，相信读完此文，您一定会有所收获。  结核分枝杆菌感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染者和既往结核感染者的 T细胞受结核抗原刺激致敏，形成活化的效应T细胞。T-SPOT.TB试验是利用结核分枝杆菌特异抗原（ESAT-6，CFP 10），刺激全血中的T细胞，结核感染者及既往感染者血液中的T细胞再次接收到抗原刺激，会迅速形成效应T细胞，并分泌γ干扰素。通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT），分泌的γ干扰素被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获，可溶的底物溶液加入到每个检测孔中，在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀再点。每一个斑点代表一个分泌γ干扰素的T细胞，计数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T细胞数量。 T-SPOT.TB用于结核感染检测、肺结核/肺外结核诊断与鉴别诊断具有独特优势: （1）特异性好：只针对结核分枝杆菌复合群敏感，对绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗(BCG) 无交叉反应。 （2）灵敏度高:基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率。 （3）快速简便:简单的血液检测，24小时报告结果。 a.临床有典型结核症状，影像学等检查支持结核病，且临床排除其它疾病，阳性结果支持活动性结核病； b.临床有典型结核症状，但检查手段未发现结核患病证据，且排除其它疾病，阳性结果支持结核分枝杆菌感染诊断，建议试验性抗结核治疗，即是治疗手段，也是诊断方法之一； c.临床无结核症状及其它结核患病证据，阳性结果临床诊断为潜伏性结核感染（LBTI）,根据风险程度决定是否用药； d.既往有结核病史或明确结核病证据，无结核症状，阳性表明曾患过结核病，不代表目前活动性结核病。 a.阴性结果代表目前机体没有结核分枝杆菌特异抗原致敏的T淋巴细胞，即目前未感染结核分枝杆菌。临床诊断上首选排除结核病，尤其在结核高发、免疫功能正常及无可靠依据的情况下； b.假阴性可能:窗口期；免疫功能不全(HlV感染者) ；特殊肺外结核(结脑) ；实验非正常操作。 T-SPOT.TB的适应证主要包括结核分枝杆菌潜伏感染的诊断和活动性结核病的辅助诊断。 a. 缺少细菌学诊断依据（如痰菌阴性）的活动性结核病的患者，可起到补充或辅助诊断的作用； b. 出现腹水或胸水的患者，可采用体液或组织标本来补充或辅助诊断结核性胸膜炎或结核性腹膜炎； c.辅助诊断儿童结核病。 a. 活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断； b. 排查儿童结核分枝杆菌（MTB）感染； c. 对HIV感染人群进行LTBI筛查； d. 需要接受糖皮质激素或肿瘤坏死因子拮抗剂等免疫抑制治疗，或需要接受化疗，或器官移植的患者排查LTBI。 根据抗原A孔或抗原B孔的斑点数判读结果: （1）当空白对照孔斑点数为0-5个时且(抗原A孔或抗原B孔班点数)减去(空白对照孔班点数)≥6,为“阳性”。 （2）当空白对照孔斑点数为6-10个时且(抗原A孔或抗原B孔斑点数)≥2X (空白对照孔班点数)，为“阳性”。 （3）如不符合上述标准，且阳性对照孔正常时检测结果为“阴性”。   a.提示患者体内存在结核分枝杆菌特异性效应T细胞，患者存在结核感染。T-SPOT.TB不能作为诊断活动性结核的金标准，必须结合患者的临床症状和其他的相关检查结果共同作出临床判断。 b.可能是其他分枝杆菌的感染引起，如堪萨斯、苏氏、戈登分枝杆菌（这些分枝杆菌可致HIV患者机会感染）。 c.皮下注射PPD也许会造成T-SPOT.TB假阳性结果，因此需同时检测T-SPOT.TB和TST时，T-SPOT.TB的血样最好在TST实验前或者实验后3天内采取。 提示患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应T细胞。但若出现以下情况，阴性结果不能排除结核分枝杆菌感染可能： a.因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的； b.免疫系统功能不全情况，如HIV感染者，肿瘤患者，儿童等； c.其他免疫学或实验非正常操作的差异。
1.采集外周全血，无须空腹，需用肝素抗凝（含肝素锂、钠），不得使用EDTA抗凝。 2.采血量要求：2岁以下儿童2-3ml；其他患者4-6ml；免疫力低下/受抑制患者6-8ml。 3.标本室温（15-25℃）保存或运输不得冷藏和冷冻。 4.样本采集后4小时内送到实验室，以便尽快完成检测。 5.一周内有输血史或做过PET-CT的患者会影响血液中淋巴细胞的分离，建议两周后再行检测。 6.运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果。周一至周四（节假日除外）当天采集并于12:00之前送至二楼长坡检验科，第二天下午5:00出结果。 T-SPOT.TB并不能区分活动性结核病和LTBI，也不能准确预测LTBI发展为活动性结核病的风险。因此，其结果不能作为单独或是决定性的诊断结核病的依据，需要结合临床症状、影像学结果、诊断性抗结核疗效等综合判断。
图文：长坡检验科 李廷鑫 编辑/审核：宣传办
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