【原】DNA快速提取：一步提取植物基因组

DNA提取是分子生物学实验中基础的技术之一，为了降低拟南芥(Arabidopsis thaliana)DNA提取的劳动力、时间和成本，研究人员建立了一种从拟南芥中进行一步式DNA提取的方法。经过多次试验，他们发现可以使用一个已知方案（Edwards等人，1991年）中的稀释提取缓冲液来成功地实现一步提取拟南芥DNA。

注意事项

该方案的目的是为了提取用作PCR模板的DNA，此外，当植物样品与提取缓冲液的比例大幅改变、使用机器猛烈压碎植物组织或将提取物加入PCR反应的体积增加时，实验可能不会成功。

操作步骤

1. 准备植物样品：从拟南芥的叶片中采集3-5mg的样品，并将其放入一个1.5毫升的塑料管中。

2. 添加提取缓冲液：向塑料管中加入200μL的提取缓冲液，这个提取缓冲液是在实验室内制备的，是将Edwards溶液（200 mM Tris-HCl（pH 7.5）、250 mM NaCl、25 mM EDTA和0.5% SDS）用TE缓冲液（10 mM Tris-HCl（pH 8）和1 mM EDTA）稀释10倍得到的。

3. 压碎植物组织：使用适合管子的塑料棒将叶片压碎并与管壁接触摩擦。经过压碎后，溶液会变为透明绿色，并可见残留的植物组织留在溶液中。

4. 去除组织残留物（可选）：如果需要去除植物组织残留物，可以在14,000 rpm下将管子进行5分钟的离心，然后回收上清液。

5. 存储提取物：无论该溶液是否带有组织残留物，可以在-20°C下存放数月而不会发生变质。

6. PCR反应：在20μL的PCR反应中，加入1μL以上溶液。需要注意的是，若加入2μL会抑制PCR反应。

PCR产物的核酸电泳结果

(A)稀释提取缓冲液对PCR扩增的影响。使用原始缓冲液(x1)和十倍(x0.1)、百倍(x0.01)、千倍(x0.001)稀释的缓冲液，以及TE缓冲液进行测试。使用引物组1扩增DNA，该组引物应该产生118 bp的DNA片段。

(B)转基因检测。使用NOB7和野生型植物进行检测。NOB7植株的转基因位点位于染色体V上NOBf(左引物)和NOBr(右引物)的目标位点之间。Binv4的目标位点(右引物)在NOB插入物上。NOB转基因植株通过NOBf和Binv4引物给出677 bp的PCR产物，而野生型植物通过NOBf和NOBr引物给出1337 bp的PCR产物。

(C)DNA微量提取的PCR产物。从1毫克叶片组织和约1 mm²的叶片组织和2个花瓣进行了普通比例的提取和微量提取。使用引物组3扩增DNA，该组引物应该产生116 bp的DNA片段。

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参考文献（上下滑动阅读）