【原】图解流式 | 第8期.流式数据的不同变体之等高线图

在前面的图解系列中，我们学习了流式数据正确圈门分析逻辑，以及如何解读文献中的流式图，但我们会发现在文献或参考材料中，常常会出现流式的不同展示方式，例如散点图、等高线图、直方图等，他们有什么区别吗？我们将在接下来的推送中，穿插流式不同的展示方式，今天我们就先一起学习流式的等高线图吧~

流式——圈门

前面我们提到流式通道主要可以分为散射光通道和荧光通道，所以至少在流式数据中出现FSC/SSC/≥1种的荧光通道，那如何在二维图像中展示呢？

流式中“门”的概念就显得极其重要了，用FSC/SSC圈出感兴趣的活的单细胞群后，可以根据自己感兴趣的细胞（例如下图的CD4⁺T细胞），圈中CD4⁺细胞群，而不显示CD4^-细胞群数据，形成一个仅有CD4⁺T细胞数据的新的流式图，再根据CD44和CD62L表达量来区分初生、记忆和效应性T细胞。

地理等高线图

高中物理中，我们曾学过等高线图，这里仅提及几点关键知识点：

1）同一图幅，同一条等高线上各点海拔高度都相等（即用闭合的环线代表海拔高度相同的地方）；

2）等高线越密集，坡度越陡，反之越缓（即等高线越密集，海波高度变化越快）；

流式等高线图

流式等高线图的原理与地理等高线图类似，可以用以下三点总结：

1）同一图幅，同一条等高线上各点细胞密度都相等（即用闭合的环线代表细胞密度相同的地方）；

2）等高线越密集，细胞密度变化越大。

3）环线的中央区域代表细胞聚集的中心。

流式等高线图的优点

前面我们提到，等密度环线的中央区域代表细胞聚集的中心，即等密度环线的中央区域代表细胞群的集中点，一般代表一个细胞群，所以在一些情况下，流式等高线图比流式散点图更能直观地体现细胞的分群。如下图我们可以看到在CD4⁺T细胞中，无论是WT小鼠还是μMT小鼠在HFD（高脂饮食喂养）后均会出现两群细胞，分别是CD44^hiCD62L^lo细胞群和CD44^loCD62L ^hi细胞群，在等高线图中能最为直观地呈现。所以可以根据想要呈现的结果来选择用散点图还是等高线图展示。

上一期最后给大家分享的流式图，不知道大家有没有尝试解读，一起来回顾一下吧~

解读：

1.分析的细胞群：CD4⁺T cells

2.双荧光通道图（分别标记为GFP与PD-1）

3.C-左图：划分PD-1高(hi)/低(lo)/不表达(null)细胞群；PD-1^hi群同时高表达GFP

C-右图：在C左图圈门逻辑基础上，在PD-1 hi/lo/null细胞群中分别观察CD153表达情况；PD-1^hi群相较于PD-1^lo/null群，明显高表达CD153(18.5% VS 3.8% VS 1.6%)

文献原文：Among CD4⁺ T cells in VAT, GFP was expressed almost exclusively in the PD-1⁺ cell population (Figure 6C, left). A detailed analysis revealed that GFP expression was largely confined to the PD-1hi population, in which the GFP expression level was well correlated with that of CD153; PD-1lo and PD-1null cells expressed minimal and negligible CD153 and GFP, respectively (Figure 6C, right).