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培养细胞的实验员都知道 细胞是非常脆弱的 而培养细胞时消化细胞是最伤害细胞的一步操作 但是这个步骤却必不可少 那么问题来了 我们如何做好细胞消化和选择合适的消化产品 是我们一定要了解的~
下面，我们整理了一些问题做统一解答~ Q1 问：什么是胰酶？ 答：胰酶其实是胰蛋白酶，是一种解离试剂，生物学实验中常用来把贴壁细胞从贴壁面解离下来和使细胞解聚，也可以用于原代细胞的传代过程中分散组织。 动物细胞表面很多和培养皿结合的蛋白都是带有钙或者离子的蛋白，而胰酶能够降解这种带有钙或者离子的蛋白，因此它可以将细胞膜上和培养皿壁结合的蛋白降解，从而使细胞的培养皿壁脱离。（胰酶中常含的EDTA能够螯合这些钙镁离子，从而促进消化。） Q2 问：胰酶的使用浓度是多少？ 答：胰酶浓度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作为消化液。 Q3 问：为什么胰酶变成黄色或橙色后还可继续使用？ 答：胰酶需要用干冰运输，在运输过程中，胰酶溶液中的二氧化碳与干冰挥发的二氧化碳可能会极少部分的气体交换，导致溶液 pH 的漂移。胰酶溶液里含有酚红作为 pH 值指示剂，因此胰酶 pH 的变化是肉眼可观察到的。 由干冰运输过程中导致的 pH 值的变化很小，pH 值会从 7.2-8 变化到了 6.8 左右。这种颜色的变化不仅存在于我们的胰酶产品上，其他供应商的胰酶产品也有类似现象。我们的实验室进行了 Biochannel胰酶变色后的效果测试实验，结果显示干冰运输导致的颜色变化对胰酶的消化作用及对细胞活率没有影响，变色的胰酶仍能很好的应用于细胞解离。 Q4 问：细胞消化时，胰酶不去除对细胞有影响吗？ 答：如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，在细胞消化时不去除是没有影响的。 如果消化液中含有胰酶和EDTA，最好去除。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要彻底清洗去除，否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。 Q5 问：胰酶的保存条件？ 答：胰酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长，胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存，在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在2-8℃长期保存。 Q6 问：胰酶中通常有哪几种选择？ 答：
01 如果希望消化能力比较强，推荐选择BC-CE-003 胰酶细胞消化液(0.25%胰酶)和BC-CE-005 胰酶细胞消化液(0.25%胰酶, 含酚红)，这 两种胰酶细胞消化液都含有EDTA，消化能力相对更强一些。 02 如果希望观察比较方便，推荐选择BC-CE-005含酚红的 胰酶细胞消化液(0.25%胰酶, 含酚红)和 BC-CE-006胰酶细胞消化液(0.25%胰 酶, 含酚红，不含EDTA)。 03 对于酚红可能会干扰后续的测试分析，推荐选择BC-CE-003不含酚红的 胰酶细胞消化液(0.25%胰酶)和BC-CE-004 胰酶细胞消化液 (0.25%胰酶, 不含EDTA)。 04 对于EDTA可能会干扰后续的测试分析时，推荐选择BC-CE-004不含EDTA的 胰酶细胞消化液(0.25%胰酶，不含EDTA)和BC-CE-006胰 酶细胞消化液(0.25%胰酶, 含酚红，不含EDTA)。 05 对于胰酶特别敏感的细胞，即对于消化时间特别快、消化时间比较难控制的情况， 推荐选择BC-CE-001胰酶细胞消化液(0.05%胰 酶，不含酚红)或 BC-CE-002胰酶细胞消化液(0.05%胰酶, 含酚红)。 |
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