【实验技巧】WB内参选择指南---那些年你该学会的实验系列（三）

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什么是内参？

内参即是内部参照（Internal Control），一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。

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内参的作用？ 

Western blot实验常常用于比较不同条件下或者不同组织中目的蛋白表达量的相对多少，而前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。因此我们加入内参是为了解决下面的两点：

1. 校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差，从而保证实验结果的准确性。

2. 内参亦可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个蛋白免疫印迹显色发光体系是否正常。

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选择内参的原则？

1.样本种属来源 哺乳动物还是植物，还是其他

2.目的分子量大小，需要与目的蛋白差5kd以上

3.蛋白表达位置，不同的细胞器内参相对应

4.内参蛋白与目的蛋白之间不能有调节作用

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内参选择指南  

为了让大家减少翻阅文献的时间，小编特意为大家整理出了动植物样品各组分的WB内参，请笑纳！（点击图片可另存为）

动物样品各组分WB内参

植物样品各组分WB内参

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文献案例

Example 1： Georgion D. K. et al. JBC (2015) 

多细胞组份分离（胞质、核蛋白、细胞器、质膜）内参验证 ：

LaminA 核表达 ；GAPDH 主要胞浆表达； VDAC主要器膜质膜表达

Example 2：LeungWH., et al (2015). J.of Immunol. 

蛋白迁移实验：F分离组份验证和定量内参照