看看这篇宾夕法尼亚大学发的21.3分的外泌体的文章，他论证相对严谨，是蛮不错的......

外泌体研究涉及的课题之多，应该是和铁死亡相提并论的……高分的外泌体研究，其实都会涉及到细胞间的Crosstalk，那高分的Exosome都是咋做的呢？（当然不能看MC和STTT咯，这点道理大家都懂的吧？）……于是夏老师找了一篇宾夕法尼亚大学发的21.3分的Nat Cell Biol上的文章，看看人家是怎么做外泌体的。

他们这个选题也蛮有意思，大家都知道，组织纤维化和ECM（细胞外基质）硬化与许多肿瘤的进展有关。他们就分析了硬化的ECM会对肿瘤造成什么样的影响。他们研究的方向是硬化的ECM对肿瘤外泌体产生的影响，他们发现，在软化的ECM上培养的肝癌细胞，并不能产生大量外泌体，而在硬化的ECM上，会促进肿瘤外泌体产生：

这里他们用了Tsg101、CD63这类常见的外泌体标志物，这些结果表明硬化的ECM会促进肿瘤细胞分泌更多的外泌体。那又是什么驱动了外泌体产生的呢？他们做了个信号通路的蛋白磷酸化激活谱的RPPA（反相蛋白质阵列）分析，也就是分析几个关键节点的激酶磷酸化程度：

他们发现4E-BP1、AKT和GSK-3β的磷酸化（这几个代表啥信号通路应该不用我再多说了吧，看过《信号通路是什么鬼？》系列的话，应该很熟悉了，4E-BP1是mTOR信号通路下游，AKT是PI3K-AKT信号通路的激酶，GSK-3β是Wnt信号通路的第二信使），在硬化ECM条件下，明显增强。其中，AKT应该起到了较为上游的关键作用，所以他们又用AKT抑制剂进行处理，发现抑制了AKT之后，硬化ECM对细胞的外泌体分泌的影响明显降低了。那么AKT是通过什么来激活外泌体产生的呢？Rab 家族小 GTP 酶是囊泡运输的主要调节因子，也受到AKT调控，于是他们检测了Rab27和Rab8受到的AKT激活影响，结果发现Rab8是受到AKT调控的，与外泌体产生密切相关的蛋白：

AKT作为激酶是如何调控Rab8的呢?这就涉及到了Rab8的磷酸化位点，他们对这个磷酸化位点进行了突变。这个验证就已经优于大多数直接敲减的验证手段了，通过AKT与Rab8之间唯一的关联节点——磷酸化位点的突变，进行外泌体表型的验证，避免了中项不周延和肯定后件的逻辑谬误（不知道只是啥的话，可以去看看《轻松的文献导读》、《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列，不赘述了）。

以此验证了硬化ECM通过AKT激活Rab8，导致外泌体增多的这条通路。接着这些肿瘤产生的外泌体会引起什么功能呢？这也就到了细胞间的Crosstalk这个环节了，他们用这些外泌体对细胞进行刺激，发现这些外泌体能促进肿瘤细胞增殖：

那外泌体是通过激活了什么样的通路促进了肿瘤细胞增殖的呢？他们通过RPPA的数据进一步分析，发现外泌体刺激后，肿瘤细胞的Notch信号通路被激活了（不知道Notch信号通路的话，应该去看看《信号通路是什么鬼？》系列的Notch信号通路那几章，复习下），Notch的下游基因表达会明显增强：

Notch下游基因Hey1、Hey2、Hes1和Sox9这些基因，硬化ECM以及外泌体处理后的细胞中明显表达上调：

那么外泌体上，到底是什么蛋白激活了肿瘤细胞的Notch信号通路呢？大家都知道Notch信号通路要激活的话，需要有Notch的配体：

而他们发现，外泌体的膜上所具有的JAG1这个Notch配体的表达明显增多，JAG1则是能与CD36和Tsg101共定位的：

也就进一步说明了硬化ECM通过激活AKT-Rab8所产生的外泌体，会通过外泌体上包含的JAG1，激活受体细胞上的Notch信号通路，促进了肿瘤细胞的增殖：

这篇文章在论证中，相对较为严谨，同时前后的关联性也十分紧密，算是外泌体研究细胞间Crosstalk的一篇蛮不错的文章。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣可以看看，祝你们心明眼亮。

喜欢夏老师讲文献的话，可以点点星标，点点赞，点点“在看”，多分享多转发。