📝WB抗体筛选指南,保你实验不出错; 🌈什么是抗原(Antigen):指所有能激活和诱导免疫应答的物质。 🌸抗原以蛋白质为主,也包括多糖、脂类和核酸等物质 🌸科研上需要检测的靶标、靶点或者目的蛋白 🌈什么是抗体:在抗原的刺激下,生物体内产生的一种免疫球蛋白( Ig )。 🌈抗体分为五个种类:IgG, IgD, IgA, IgE和IgM 🌈一抗:可以与特定蛋白质或感兴趣的生物分子结合的抗体称为一抗。 🌸确认抗原信息:数据库可查,包括分子量、组织特异性、亚细胞定位、同源异构体等等 🌸抗体的宿主(一般以大鼠、小鼠、山羊和兔等动物为宿主,分为mAb或pAb) mAb:单克隆抗体,由动物的单个 B 细胞克隆产生,只含有一个特定的抗原结合位点(副表位),该位点通常仅与一个表位具有高亲和力和特异性结合;不产生或少产生背景染色,可降低与其他蛋白质发生交叉反应的可能性; pAb:多克隆抗体,由动物的多个 B 细胞克隆产生,并具有针对抗原的几个表位的抗体的异质混合物,可以结合单一抗原的多个表位,能够识别抗原中的微小变化,产生更强的抗原检测信号,适用于涉及变性蛋白质的检测实验; 🌸样本的反应种属:该抗体可以检测什么类型的样本; 🌸实验应用:该抗体可以做什么实验; 🌸抗原的表位:WB 线性表位;IHC, IF 构象表位; 🌈二抗:是由一抗种属(比如兔,小鼠)的某一亚型的免疫球蛋白IgG免疫哺乳动物(一般是免疫山羊、马、驴、骡和豚鼠及小鼠等动物)产生的抗体,能和特定物种特定亚型的一抗结合,其主要作用是检测一抗的存在,放大一抗的信号,比直接标记一抗的成本低; 🌸种属:二抗和一抗种属要匹配;比如,羊抗小鼠(二抗)会特异性结合小鼠单抗(一抗)而不会结合兔多抗或大鼠单抗; 🌸二抗标记的类型:酶类标记 – AP, HRP;荧光标记 – FITC, PE, Cy7;其他标记 – Biotin |
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