肿瘤干细胞成球实验（上）

昨天是情人节，街道上人来人往，唯有我这只单身狗，在墙角瑟瑟发抖缩成球……

哎，慢着！仅靠自己就想成球？

你知道细胞要想成球需要具备什么样的条件吗？

嗯，首先当然是不能一直孤寡啦！顾名思义，就是需要多个细胞成团才能实现成球……

所以，生而为人，如果孤寡那你连缩成球的资格都没有！不过没关系，咱们寡王一路硕博嘛～

好啦，接下来进入正题——

细胞球体形成实验（sphere-formation assay）是将单细胞悬液均匀铺在非依赖型（anchorage-in-dependent condition）培养皿中培养，大部分贴壁细胞因没有贴壁的条件通过 anikosis 途径走向细胞凋亡，而部分细胞可在这样的环境下由单个细胞生长成一个细胞团，且能在体外进行多次传代。而且，在肿瘤干细胞的研究中发现，当细胞球体接种到动物模型体内，能够长出肿瘤并能连续多次种植，提示细胞球体内富集具有自我更新能力的肿瘤干细胞。因此，细胞成球实验常被用于富集肿瘤干细胞。成球大小及数目是衡量肿瘤细胞干性的重要体现，一般用细胞球形成效率（Sphere Formation Efficiency，SFE）表示。

实验材料

（1）超低吸附培养皿：可以选择 6/12/24 孔板；

（2）基础培养基：视细胞情况而定，例如 1640 或者 DMEM/F12；

（3）B27（50X）：B27 包含抗氧化剂、蛋白，维生素和脂肪酸，这些养分可保证细胞快速增殖，且抗氧化成分可以减少细胞氧化损伤；

（4）重组表皮生长因子（EGF）：EGF 是第一个被发现的生长因子，对调节细胞生长和增殖起着重要作用，进而促进细胞新陈代谢；

（5）碱性成纤维生长因子（bFGF）：又称 FGF2，其作用是使细胞保持未分化的状态；

（6）胰岛素（Insulin）：在无血清细胞培养液中，常添加胰岛素来维持细胞生长，调节细胞对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的摄取、利用和贮存，同时抑制糖原、蛋白质和脂肪的分解。

实验步骤

（1）将状态良好的细胞消化后离心收集，并用 PBS 清洗 2 次；

（2）细胞计数并用超低吸附的细胞培养板培养细胞，密度视细胞生长速度而定，可参考该细胞株进行平板克隆实验的密度；

（3）使用上述实验材料进行干细胞培养，注意是无血清培养！

（4）每天观察细胞的成球情况，并在显微镜下拍照记录细胞的成球情况（高低倍镜下最好分别 3 个以上视野）。

图片来自百度

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怎么样，这个实验还是很简单的吧？不过要做到坚持观察也是需要一定的恒心的呢！

下一篇再给大家介绍成球实验的结果数据处理吧~（大约需成球培养十天左右）

好了，祝大家情人节快乐！每天都要开开心心的呀！