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致力于开发基于CRISPR技术疗法来治疗严重的病毒性传染病的临床阶段生物技术公司 Excision BioTherapeutics 近日宣布，公司将在2024年5月7日至11日于马里兰州巴尔的摩举行的美国基因与细胞治疗协会（ASGCT）2024年年会上展示其乙型肝炎病毒（HBV）治疗项目的积极数据。乙型肝炎病毒（HBV）是全球最流行的传染病之一，但却缺乏治疗方法。目前批准使用的抗病毒药物和免疫调节剂可降低病毒载量，从而减缓肝损伤的进展，但却无法消除使病毒持续感染的cccDNA。基因编辑具有针对包括cccDNA在内的所有形式病毒DNA的巨大潜力，可为功能性治愈甚至更好的临床疗效提供新的选择。Excision BioTherapeutics 已经开发出多种使用成对引导 RNA 的候选疗法，研究人员假设，在多个位点产生的 DNA 链断裂可导致大缺失（切除），从而消除病毒基因组的大片区域，有效灭活并防止逃逸变体的出现。在 ASGCT2024 上，研究人员发表了在细胞试验和体内针对 HBV 的双导 RNA 介导的编辑策略评估结果。在专有计算方法的基础上，研究人员确定了多种核酸酶和引导对，以HBV基因组中保守位点为目标。然后，将这些选定的引导靶位点与人类参考基因组进行交叉比对，以选择与人类基因序列具有最少序列相同性的位点，从而最大限度地减少脱靶编辑的机会。通过使用在染色体 DNA 中整合了部分 HBV 基因组的报告细胞系，确定了几对引导 RNA，这些引导 RNA 能有效地删除在大量 HBV 分离物中发现的目标位点之间的序列。通过筛选整合了部分 HBV 基因组的报告细胞系，研究人员确定了一对导向 RNA，它们能有效地删除在大量 HBV 分离物中发现的目标位点之间的序列。在 HBV 感染细胞中测试编辑核酸酶和成对引导 RNA 的精选组合时，研究人员观察到 HBV DNA 总拷贝的减少。在体内进行概念验证研究，在用 AAV-HBV 建立的 HBV 小鼠模型中静脉注射了一种脂质纳米颗粒（LNP），其中封装了编码编辑核酸酶的 mRNA 和一对引导 RNA。单次给药 LNP 能明显降低血清中的 HBV 生物标志物。与这一观察结果相一致的是，研究检测到肝内 HBV 水平降低，这表明 HBV DNA 的切割促进了其在体内的降解。这些结果为将潜在的治愈性CRISPR-Cas HBV疗法推进到 IND-Enabling Studies 阶段和人体临床研究奠定了基础。
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