2024年第113届美国和加拿大病理学会（USCAP）年会于2024年3月23日至28日在美国马里兰州巴尔的摩市举行。 USCAP年会是世界上规模最大、最具影响力的病理学专业学术会议，每年都有数千名来自医院、私人实验室、学术机构和政府机构的病理学和分子、毒理学、肿瘤学和免疫学等相关专业领域的专业人士出席会议。 USCAP是病理学界最具影响力的国际学术组织之一，是全球病理学领域知识传播的全球领导者，拥有超过1万名病理学家会员。USCAP通过促进研究、组织科学性会议和出版科学性杂志来丰富、发展和传播有关人类病理学和比较病理学的知识。 作为病理人，兼具学术使命和学者担当，杂志作为国内病理领域学术媒体平台，报道学科前沿进展。若您已积极参会，欢迎您把听课内容或学习体会进行整理，传达会议病理领域新进展，与国内病理同道们进行分享。因由不同整理者提供，部分会议内容会有重复，读者可以综合参考。 资料可发至邮箱：cjpa@cmaph.org 再次感谢您的支持！ 
1531肺小腺癌中的浸润及原位腺癌区域的测量——一项基于基因检测结果，WHO分类和改良分类的可重复性研究 1531: Invasion Measurement and Adenocarcinoma In-Situ in Small Pulmonary Adenocarcinoma. A Reproducibility Study According to the WHO and a Modified Classification, Supported by Molecular Profiling Federica Filipello1, J.L.G. Blaauwgeers2, Birgit Lissenberg-Witte3, Yuko Minami4, John Le Quesne5, Mauro Papotti6, Giuseppe Pelosi7, Irene Sansano8, Sabina Berezowska9, Ales Ryska10, Luka Brcic11, Noriko Motoi12, Yukio Nakatani13, Christiane Kuempers14, Giulio Rossi15, Francesca Ambrosi16, Daisuke Matsubara17, Yuichi Ishikawa18, Birgit Weynand19, Federica Pezzuto20, Izidor Kern21, Siobhan Nicholson22, Aino Mutka23, Sanja Dacic24, Mary Beth Beasley25, Gianluigi Arrigoni1, Wim Timens26, Mariel Brinkhuis27, Rieneke Britstra28, Nicole Bulkmans29, Willem Vreuls30, Douglas Flieder31, Kirk Jones32, Jan von der Thüsen33, Sven Perner34, David Moore35, Henrik Hager36, Diana Leonte37, Andreas Schønau38, Klaus Kluck39, Iordanis Ourailidis40, Markus Ball40, Jan Budczies40, Daniel Kazdal40, Vibeke Grotness Dale41, Albrecht Stenzinger42, Erik Thunnissen43 1IRCCS San Raffaele Scientific Institute, Milan, Italy, 2OLVG lab BV, Amsterdam, Netherlands, 3Amsterdam UMC, Amsterdam, Netherlands, 4National Hospital Organization Ibarakihigashi National Hospital, Ibaraki, Japan, 5NHS Greater Glasgow and Clyde/University of Glasgow, Glasgow, United Kingdom, 6University of Turin, Torino, Italy, 7University of Milan, Milan, Italy, 8Hospital Universitari Vall d'Hebron, Barcelona, Spain, 9Institute of Pathology, CHUV, Lausanne, Switzerland, 10Charles University, Hradec Kralove, Czech Republic, 11Medical University of Graz, Graz, Austria, 12Saitama Cancer Center, Ina, Japan, 13Yokosuka Kyosai Hospital, Yokosuka, Japan, 14University Medical Center SchleswigHolstein, Leibniz Center for Medicine and Biosciences, Lübeck, Germany, 15Azienda USL Romagna, Ravenna, Italy, 16Maggiore Hospital, University of Bologna, Bologna, Italy, 17Jichi Medical University, Shimotsukeshi, Japan, 18International University of Health and Welfare, Mita Hospital, Tokyo, Japan, 19UZ Leuven, Leuven, Belgium, 20University of Padova, Padova, Italy, 21Golnik, Slovenia, 22St. James's Hospital, Dublin, Ireland, 23HUS Helsinki University Hospital, Helsinki, Finland, 24Yale School of Medicine, New Haven, CT, 25Mount Sinai Medical Center, New York, NY, 26University Medical Center Groningen, Groningen, Netherlands, 27LabPON, Hengelo, Netherlands, 28Meander Medisch Centrum, Amersfoort, Netherlands, 29St. Antonius Hospital, Nieuwegein, Netherlands, 30Canisius Wilhelmina Hospital, Nijmegen, Netherlands, 31Fox Chase Cancer Center, Philadelphia, PA, 32University of California, San Francisco, San Francisco, CA, 33Erasmus MC, Rotterdam, Netherlands, 34Luebeck, Germany, 35University College London Cancer Institute, London, United Kingdom, 36Aarhus University, Aarhus, Denmark, 37Personal Genetics Laboratory, Bucharest, Romania, 38Copenhagen, Denmark, 39Institute of Pathology, Heidelberg University Hospital, Heidelberg, Germany, 40Heidelberg University Hospital, Heidelberg, Germany, 41Olav's Hospital Trondheim, Norway, 42University of Heidelberg, Ingolstadt, Germany, 43Amsterdam UMC, Amsterdam, Netherlands 背景：评估肺的非黏液性腺癌（NMA）的侵袭性对分期至关重要。去年，我们在USCAP上提出了一种改进的NMA分类方法。本研究的目的是检查此分类方法的重复性和分子改变。 研究设计：通过NMA（pT1N0M0）回顾性队列进行病例对照研究，收集来自2家机构的5年随访数据。42名肺部病理学家对70例数字化病例进行了回顾性分析：根据2021年WHO分类和改良分类，识别塌陷的原位腺癌。根据41位专家的反馈，进行了第三轮判读。对每个病例浸润性和/或贴壁成份的热点地区进行MIB-1计数，并对基因突变和信号通路生物标志物进行正交实验分析：DNA测序分析了69例肿瘤（59例浸润性和10例非浸润性肺腺癌），RNA测序分析了23例肿瘤（12例浸润性和11例非浸润性肺腺癌）。 结果：来自13个国家的42名病理学家在前2轮对所有70例病例进行评分，第三轮对36名病理学家进行反馈。第1轮（WHO）、第2轮和第3轮（改良分类）的kappa值分别为0.27、0.45和0.62。浸润性腺癌通过MIB1免疫组化（p=0.0005）评估的增殖率、肿瘤突变负荷（平均11.2mut/Mb）（平均4.6 mut/Mb，p=0.007）和TP53突变（p=0.014）均高于非浸润性腺癌。在两组肿瘤之间进行了检测分析，检测到273个显著差异表达的基因，并进行了聚类分析。分级聚类后，两个cluster（聚类）可以完全分离，接收者-操作者-特征曲线下的面积超过0.9（见图1）。不同的基因表达模式与肿瘤的侵袭性、上皮-间质转化和增殖相关。 结论：改进后的NMA分类方法优于目前的WHO分类方法。正交基因分析结果支持浸润性和原位腺癌的改良分类。 
1532使用多重组织循环免疫荧光技术对同一载玻片上的多个PD-L1抗体进行比较评估 1532: Comparative Assessment of Multiple PD-L1 Antibodies on the Same Slide Using Multiplex Tissue-Based Cyclic ImmunofluorescenceAndréanne Gagné1, Jia-Ren Lin2, Sandro Santagata3, Lynette Sholl4, Peter Sorger21Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School, Boston, MA, 2Harvard Medical School, Boston, MA, 3Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, Boston, MA, 4Brigham and Women's Hospital, Boston, MA背景：PD-L1免疫组化（IHC）是FDA批准的一种辅助诊断标志物，用于非小细胞肺癌（NSCLC）中PD-1和PD-L1的疗效评估。其实施存在许多挑战，如敏感性不一、存在空间异质性和多种抗体的评估结果比较。虽然之前的研究显示了不同克隆号抗体之间总体上一致但存在不完全一致性，比较这些结果必然使用了不同的组织切片和人工评分。高倍荧光空间图谱（循环免疫荧光，CyCIF）允许在单细胞和像素水平上使用定量指标来比较同一组织切片上的所有抗体。我们报道了使用CyCIF来研究抗体选择和肿瘤微环境对NSCLC中PD-L1水平检测的影响。 研究设计：根据胸部病理学家测定的PD-L1肿瘤IHC比例评分（TPS）标准，选择9例NSCLC患者的全部切片（E1L3N克隆，每组3例：< 1%，1%-49%，≥50%）。另外还使用了一个含有87例 NSCLC的组织芯片。使用5种PD-L1抗体（28-8、22C3、E1L3N、SP142、CAL10）、谱系标记物和其他免疫检查点标记物（pan-keratin、CD3、CD11b/c、PD-1、MHC1）进行CyCIF检测。PD-L1 TPS由胸部病理学家进行评分。利用TPS的组内相关系数（ICC）和皮尔逊相关系数R对IHC和CyCIF之间以及CyCIF抗体之间的一致性进行评估。 结果：IHC的PD-L1 TPS评分与CyCIF（仅E1L3N克隆，ICC=0.972）高度一致。通过CyCIF检测，发现PD-L1抗体的染色质量存在差异。28-8和22C3 IF的信噪比（SNR）较低，而SP142的染色强度相对较低。然而，在所有5种抗体（ICC=0.758）之间发现了TPS的高度一致性，两两比较显示ICC范围为0.658至0.936。逐像素信号的两两比较显示，相关性在0.59到0.92之间，E1L3N和CAL10之间的一致性最高。 结论：CyCIF检测的E1L3N与IHC高度一致。尽管染色质量不同，但不同PD-L1抗体测量的TPS评分之间有良好的一致性。目前正在进行相关的研究，比较不同免疫细胞中抗体的表达差异，以及与其它免疫调节剂的关系，以更好地理解染色的可变性。 1533 EGFR敏感的非小细胞肺癌伴或不伴EGFR扩增对一线奥西替尼治疗显示相似的敏感性。获得性EGFR扩增是罕见的，但由于没有完善的NGS测序结果分析，或许是一个潜在的治疗缺陷 1533: EGFR Sensitive Non-Small Cell Lung Cancer with and without EGFR Amplification Show Similar Sensitivity to First Line Osimertinib. Acquired EGFR Amplification is Rare but Presents a Potential Therapeutic Pitfall without Close Analysis of Next Generation Sequencing ResultsTayler Gant1, Parastou Tizro1, Matthew Gayhart11Cedars-Sinai Medical Center, Los Angeles, CA背景：EGFR扩增已被证实是EGFR TKI治疗的敏感性和耐药性增加的标志。显示敏感性增加的研究主要是使用一二代的TKIs，而不是目前的新的三代靶向药物-奥西替尼。临床前研究已经确定了野生型EGFR等位基因的扩增是TKI耐药性的一个原因。然而，在临床实践中，这种基因异常并没有在NGS检测中常规检测，获得性EGFR扩增为奥西替尼耐药性机制的论文中也未直接提及。为了确定奥西替尼耐药性中EGFR扩增的真正临床意义，我们对机构的EGFR改变的NSCLC队列进行了回顾性研究。 研究设计：我们回顾性研究了2019年4月至2023年7月期间来自38例患者的44个EGFR扩增的NSCLC标本。其中11例患者接受了一线奥西替尼治疗，并进行了至少12个月的临床随访。NGS已作为OCA v3或OCA Plus平台的常规临床实践的一部分进行，本研究中这两种平台都被用于检测EGFR的改变和扩增。电子病历中获取临床信息，包括分期、对奥西替尼的反应、其它治疗史和进展时间。14例经一线奥西替尼治疗，EGFR敏感NSCLC患者（与分期、收集日期和EGFR突变匹配）但无EGFR扩增的患者也入组了此研究。 结果：一线奥西替尼、EGFR扩增组与未扩增组的总缓解率（ORR）和中位无进展生存期（PFS）（91% ORR EGFR扩增与100%未扩增；p=0.44）（EGFR扩增14个月PFS.VS.未扩增16个月PFS；p=0.9479）无显著差异。在随后的活检中发现了两例患者“新出现”EGFR扩增。令人惊讶的是，这两例患者都未接受过EGFR TKI治疗。NGS检测结果显示，后期随访活检中的肿瘤细胞数量几乎是原始活检肿瘤细胞数量的两倍。 结论：这些结果表明，EGFR扩增在奥西替尼一线治疗中保持了敏感性。在发现新的EGFR扩增选择治疗方案时应谨慎，特别是当原始活检质量较差时。肿瘤细胞含量低是导致NGS检测中基因扩增假阴性结果出现的原因。 1534: Morphological Variability in Lymphangioleiomyomatosis (LAM) Michelle Garlin Politis1, Mary Salvatore2, Anjali Saqi2 1Columbia University Irving Medical Center, New York Presbyterian Hospital, New York, NY, 2Columbia University Irving Medical Center, New York, NY 背景：淋巴管平滑肌瘤病（LAM）是一种罕见的进行性肺间质肿瘤，女性好发。其特征是囊肿及血管、淋巴管或间质的平滑肌异常增生，但其多种形态学的变化尚不清楚。本研究的目的是描述LAM不同的形态学改变，并将其与影像学相关联。 研究设计：我们对行楔形切除术或全肺切除术的患者，病理诊断且经免疫组化证实的LAM，进行了20年的回顾性分析。对标本进行形态学检查，分析其相应的CT图像，并收集临床资料。 结果：对13例LAM患者进行了检查。我们注意到3种病理和放射学模式。病理类型包括1）肺气肿型；2）致密梭形细胞型；3）局灶性结节型。胸部CT图像为11例患者，显示3种模式：1)弥漫性囊性伴肺气肿到肺大泡型背靠背囊肿，最常见的是肺气肿病理模式，2)分散囊肿，主要发现在病理结节模式，和3)斑片状囊肿与周围实质纤维化，主要见于致密型（图1）。11例患者中有9例的病理和影像学表现一致（图2）。 结论：LAM具有形态异质性，有三种形态。由于局灶性肿瘤性平滑肌增生，局灶性结节型和肺气肿型的诊断具有挑战性。与影像学检查结果高度一致。需要额外的临床相关性来确定这些是否代表不同的阶段或预后，以改善分类。 
1535：微结节性肺泡上皮增生（MNPH）的分子特征：具有恶性潜能的肿瘤？ 1535：Molecular Characterization of Micronodular Pneumocyte Hyperplasia (MNPH): Neoplastic with Malignant Potential?Michelle Garlin Politis1, Mahesh Mansukhani2, Yue Gu2, Lahari Koganti2, Ladan Fazlollahi2, Jason Chang3, Susan Hsiao1, Anjali Saqi21Columbia University Irving Medical Center, New York Presbyterian Hospital, New York, NY, 2Columbia University Irving Medical Center, New York, NY, 3Memorial Sloan Kettering Cancer Center, New York, NY背景：微结节性肺泡上皮增生（MNPH）是一种罕见且鲜为人知的病变，与结节性硬化症（TSC）和淋巴管平滑肌瘤病（LAM）相关，在形态学上与非典型腺瘤性增生（AAH）和原位腺癌（AIS）难以区分。最初被认为是肺泡细胞的良性错构瘤性增生，很少有报道显示存在癌、TSC杂合性缺失（LOH）或BRAF突变。我们的研究旨在确定MNPH病变的分子特征。 研究设计：回顾性研究临床怀疑或病理证实的TSC或LAM的非典型肺泡细胞（AP）谱中的病变。对病变进行显微解剖，并使用586个基因的Panel进行DNA-NGS测序，以阐明其分子突变特点。 结果：4例患者中有9例AP灶测序成功，3例临床确诊，1例疑似LAM（表1）。2例患者（4个AP灶）出现TSC2突变。1例有3个AP灶的患者有TSC1突变，包括2个灶的BRAF D594N驱动突变和第3个灶的MAP2K1 E203K驱动突变，第四例患者存在FLCN突变，提示可能为Birt-Hogg-Dube（BHD）综合征。 结论：根据所定义的标准，所有7个出现TSC1和TSC2突变的AP灶均与MNPH一致。患者3中BRAF和MAP2K1的额外突变与MAPK通路的激活相一致,被认为具有致癌性和转化潜力。DNA-NGS检测可作为：1)在疑似TSC/LAM中区分MNPH与AAH/AIS，2)识别未通过种系检测证实的散发性LAM或嵌合型TSC，3)区分囊性肺疾病（LAM与BHD）。该研究需要进一步的分析来提供更多的描述。 
1536：Distinct Pulmonary Vasculopathy Pattern of Post COVID-19 Michelle Garlin Politis1, Anjali Saqi2 1Columbia University Irving Medical Center, New York Presbyterian Hospital, New York, NY, 2Columbia University Irving Medical Center, New York, NY 背景：严重COVID-19患者的肺损伤可见肺血管病变，并被描述为“毛细血管瘤样改变”、“套叠式血管生成”、“叠加行”和“肾小球样”增生。本研究旨在比较从非重症COVID-19中恢复的患者与在COVID-19之前接受移植的患者的肺外植体中是否存在血管增殖性病变。 研究设计：进行了一项有非重症COVID-19病史的非COVID-19相关肺外植体的回顾性研究（2023年3月25日至9月21日）。将这些病例与COVID-19前（2019年10月之前）来自各种终末期肺病患者的肺外植体进行了比较（表1）。分析血管形态学特征。 结果：我们回顾了6例COVID-19后对照病例和30例COVID-19前对照病例（表1）。有COVID-19病史既往或同时无急性肺损伤或肺动脉高压的患者存在血管病变，表明在初始急性感染期之后可能有血管受累。病变不同于肺动脉高压引起的肺淤血和肺毛细血管瘤病（图1）。它们包含“交叉线”图案，并一致显示：1) 相互交叉的细毛细血管增殖，2) 垂直于肺泡壁排列，3) 多灶性分布。在30个对照样本中，包括患有肺动脉高压（原发或继发于潜在的间质性肺疾病）的样本，只有一个病例出现局灶性血管增生（图1）。 结论：COVID-19初始急性感染期后的一系列慢性疾病已有报道，包括纤维化、机化性肺炎和微血管受累。这项研究提供了非重症COVID-19病史后个体肺部独特的“交叉线”血管病变的证据，与急性发作时的情况类似，这表明该病毒与长期血管模式后遗症之间存在潜在联系。 
Figure 1-1536 
1537：精准免疫治疗前提下小细胞肺癌免疫微环境特征的初步研究 1537：Characterizing the Small Cell Lung Cancer Tumor Immune Microenvironment for Precision Immunotherapy: A Pilot StudyAkif Guney1, Jing Di2, Dana Napier3, Dava Piecoro4, Sara Bachert5, Kimberly Absher4, Justin Miller2, Therese Bocklage61Memorial Sloan Kettering Cancer Center, New York, NY, 2University of Kentucky College of Medicine Dept. of Pathology and Laboratory Medicine, Lexington, KY, 3University of Kentucky Markey Cancer Center, Lexington, KY, 4University of Kentucky, Lexington, KY, 5Brigham and Women's Hospital, Boston, MA, 6University of Kentucky College of Medicine, Lexington, KY背景：小细胞肺癌（SCLC）虽仅占肺癌的15%，但是位于所有癌症死亡率的第六位。5%-10%的患者生存期超过三年，可能是由于抗肿瘤免疫反应的增强而导致的这种特殊的生存率。尽管小细胞癌通常被描述为“免疫沙漠”或存在免疫抑制性的肿瘤免疫微环境（TIME）。迄今为止, 免疫疗法仅对一部分患者有效。我们假设原发性和转移性SCLC中，特定的、可测量的TIME特征会显著影响生存。此外，TIME特征可以为根据个体特异的免疫微环境条件定制的最佳免疫治疗提供信息，。 研究设计：我们从SEER登记表中选择出SCLC患者。创建了两个匹配的队列：一组有12名预期生存患者（<14个月），另一组有12名特殊幸存者（>36个月）。使用GeoMX (NanoString Inc) 和 Comet平台(Lunaphore)，我们通过数字空间分析和免疫荧光检测在肿瘤细胞块切片上评估了78种免疫肿瘤学标记物。这些标记物包括谱系抗原、细胞因子和缺氧相关蛋白。此外，4名细胞病理学家评估了切片，以预测异常存活率。 结果：在GeoMX空间分析中，特殊幸存者的4个免疫应答相关蛋白（CCND1、CD27、CD274、CD74）与预期生存者的基因表达有统计学意义的差异（主成分分析P=4.135 x 10-3）。多重IF染色与通过空间分析平台定量的肿瘤细胞和免疫细胞相关。值得注意的是，CD27表达的减少与较短的生存率相关（P=0.003163）。在4位细胞病理学家独立研究设计的病例形态学分组中，有一种显示与生存率显著相关（P=0.014）。 结论：来自12名预期生存者和12名异常SCLC幸存者的初步研究结果强调了SCLC TIME对生存率的潜在重大影响。包括CD27表达水平在内的各种免疫标记物的表达模式可以推断出对特定免疫治疗方案的不同反应。生存与形态特征的部分相关性研究表明：基于细胞蜡块切片的苏木素和伊红染色的显微镜检查与人工智能算法相结合，具有预测预后和免疫治疗疗效的潜力。 
Figure 1-1537 1538：TROP2在肺高级别神经内分泌癌中的表达 1538：TROP2 Expression in High-Grade Neuroendocrine Carcinoma of the LungTakafumi Handa1, Takuo Hayashi1, Kazuya Takamochi1, Ayako Ura2, Tsuyoshi Saito1, Takashi Yao2, Kenji Suzuki11Juntendo University Graduate School of Medicine, Tokyo, Japan, 3Juntendo University, Bunkyo-ku, Japan背景：肿瘤相关钙信号转换器2（TROP2）是一种细胞表面糖蛋白，是与多种癌症发生、侵袭和转移有关的癌基因。靶向TROP2的抗体-药物偶联物是治疗表达TROP2的癌症，包括非小细胞肺癌（NSCLC）的一种很有前途的策略。然而，TROP2在高级别肺神经内分泌癌中的表达情况及其临床病理特征仍是未知的。 研究设计：该队列纳入90例手术切除的高级别神经内分泌癌（NEC）患者，其中77例为小细胞肺癌（SCLC），13例为大细胞神经内分泌癌（LCNEC）。我们使用免疫组化评估了TROP2的表达情况。当≥10%的肿瘤细胞出现膜染色时，认为肿瘤为TROP2阳性。对于所有肿瘤，均有ASCL1、NEUROD1和POU2F3的免疫组化表达谱。根据ASCL1、NEUROD1和POU2F3染色模式，我们将肿瘤分组如下：ASCL1阳性（NEC-A）、NEUROD1阳性（NEC-N）、ASCL1/NEUROD1双阴性且POU2F3阳性（NEC-P），三种标记物均为阴性（NEC-I）。 结果：10例（11%）患者中可见TROP2的表达：3例SCLCs，4例混合型SCLCs（3例混合腺癌成分，1例混合鳞状细胞癌成分），2例LCNECs，1例混合型LCNEC（混合鳞状细胞癌成分）。在TROP2阳性的病例中，SCLC或LCNEC细胞中可见中至强的膜染色。TROP2阳性的癌细胞比例在10%-90%之间（平均28%）。TROP2阳性NECs的表达与混合型显著相关（P=0.0246），而TROP2的表达与其它临床病理因素无相关性。根据基因表达情况，肿瘤的分子亚型分布为：46例NEC-A（51%），22例NEC-N（24%），17例NEC-P（19%），5例NEC-I（6%)。其中，5例NEC-A、3例NEC-N和2例NEC-P肿瘤表达TROP2，而NEC-I肿瘤不表达TROP2。 结论：我们的研究结果显示，约10%的NECs表达TROP2，并与混合型相关。TROP2在SCLC和LCNEC亚群中的表达提示TROP2可以作为TROP2定向治疗的治疗靶点，特别是在混合型中。 1539：免疫细胞丰度和空间位置的多维特征预测晚期非小细胞肺癌PD-1/PD-L1免疫治疗的疗效 1539：Multidimensional Signature of Immune Cell Abundance and Spatial Location Predicts the Efficacy of PD-1/PD-L1 Blockade Therapy in Advanced Non-Small Cell Lung Cancer Zijuan Hu1, Zhihuang Hu2, Xiaoyan Zhou3, Ping Wei1 1Fudan University Shanghai Cancer Center, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai, China, 2Fudan University Shanghai Cancer Center, Fudan University, Shanghai, China, 3Affiliated Cancer Hospital of Fudan University, Shanghai, China 背景：非小细胞肺癌（NSCLC）是全世界最有侵袭性的恶性肿瘤之一。近年来，以阻断程序性细胞死亡受体-1（PD-1）及程序性细胞死亡配体-1（PD-L1）为代表的免疫治疗策略极大地改善了晚期NSCLC的预后。然而，目前仍缺乏理想的生物标志物来准确地指导患者分层，以进一步扩大免疫治疗的临床疗效。在这里，我们从免疫细胞亚群的丰度和空间位置等方面对免疫微环境进行了全面的分析，以预测具有不同免疫治疗疗效的患者群体的特征。 研究设计：回顾性收集46例接受抗PD-1/PD-L1免疫治疗的晚期NSCLC患者治疗前FFPE肿瘤样本；采用多重免疫组化（mIHC）同时检测PD-1、PD-L1、CD8、CD163、FoxP3和pan-CK；定量计算一系列免疫微环境细胞亚群的分区（肿瘤或间质）丰度和空间位置（邻近评分）；采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis检验评估患者组间细胞丰度和空间分布的差异；采用Kaplan-Meier曲线和对数秩和检验来评估生存预后的差异；用logistic回归、Cox回归和LASSO回归分析来表征免疫治疗反应和生存的特征。 结果：一般来说，CD8+细胞更高的丰度和邻近指数与更好的免疫应答和更高的存活率有关，而CD163+细胞则相反；除外CD8+细胞，高丰度的PD-L1+的间质细胞或免疫细胞可能是不良的生存预后因素。为了预测对免疫治疗的反应，我们根据CD8+FoxP3-PD-1- 细胞的总体密度、CD163+ 肿瘤细胞的密度以及 CD8+PD-1+ 和 CD8+PD L1 的邻近评分（AUC=0.98）建立了细胞多维特征。该特征能够预测抗PD-1/PD-L1免疫疗法的客观反应和晚期NSCLC患者的生存率。 结论：特异性的多维肿瘤免疫微环境特征分析作为晚期NSCLC免疫治疗疗效的潜在生物标志物，值得探索；检测晚期NSCLC间质或免疫细胞上的CD8、CD163和PD-L1可能具有潜在的临床应用价值。 1540：FGF/FGFR信号通路改变：NSCLC的临床病理和微环境特征 1540：FGF/FGFR Signaling Alteration: The Clinicopathological and Microenvironmental Characteristics in NSCLC Ziling Huang1, Yuan Li1 1Fudan University Shanghai Cancer Center, Fudan University Shanghai Medical College, Shanghai, China 背景：成纤维细胞生长因子（FGF）配体及其受体的改变已被确定为非小细胞肺癌（NSCLC）的有效靶点。然而，FGF/FGFR信号通路的复杂变异多样性尚未得到很好的解释。 研究设计：本文总结478例存在FGF/FGFR变异的NSCLC病例，描述了其复杂的基因变异的多样性，并分析了其临床病理特征。通过多重免疫荧光进一步对10例NOTCH1/FGF/FGFR突变的患者进行染色分析，以研究T细胞浸润和癌症相关成纤维细胞（CAFs）亚型。 结果：首先，通过NGS测序，发现10.27% (478/4656) 的NSCLC患者存在FGF/FGFR突变（图 A）。FGF/FGFR 变异在鳞状细胞癌（SQ，40.68%，图B）中比在腺癌（AD，8.37%，图C）中更常见。此外，约24.69%（118/478）的病例携带致病性变异（PV），而78.45%（375/478）携带意义不确定的变异（VUS）。其中15例（3.14%，15/478）同时存在PV和VUS（图D）。其次，FGF/FGFR拷贝数的增加是致病性变异中最常见的一种（83.05%，图E）。而主要的FGFR基因融合亚型为FGFR3-TACC3（57.14%，图E)，在组织学上倾向于显示透明的细胞质。另一个惊人的发现是，几乎所有的FGF19扩增都伴随着CCND1扩增（95.35%，41/43）。FGFR1扩增是NOTCH1突变病例中的主要变异（31.25%，5/16，图F)，尤其是在鳞癌中。而且，有趣的是，在KRAS突变病例中，FGF/FGFR错义突变的比例为70.83%（(34/48，图G）。此外，PD-L1高表达和高IASLC分级都与FGFR突变相关。而携带FGF/FGFR错义突变/KRAS突变的患者以吸烟者或既往吸烟者为主，其中14.71%（5/34）的患者预后较差。最后，与NOTCH1/其它-FGF/FGFR突变组（6/10）相比，NOTCH1/FGFR1扩增组（4/10）的TregCD4+/FOXP3+和免疫抵抗CAFsFAP+/ α-SMA+的比例明显较低，肿瘤内CD8+T细胞浸润较多（图H-J）。 结论：FGF/FGFR的改变主要发生在鳞状细胞癌中。NOTCH1/FGFR1扩增亚型形成了一个免疫治疗敏感的微环境。此外，整合FGF/FGFR和KRAS靶点治疗可能是革命性的。这些研究丰富了我们对FGF/FGFR信号通路相关的NSCLC特征的认识。 Figure 1-1540 1541：一种基于深度学习、采用半监督方法对非小细胞肺癌IHC染色图像的肿瘤区域识别 1541：A Deep Learning-Based Tumor Area Identification Using a Semi-Supervised Approach for IHC Stained Images in Non-Small Lung CarcinomaYunseob Hwang1, Hyeon Seok Yang1, Yoon-La Choi2, Kyungsoo Jung3, Young Kee Shin4, Ji-Hye Nam5, Jun Young Choi6, Kyung-Eui Park6, Tae-Yeong Kwak7, Sun Woo Kim1, Hyeyoon Chang11Deep Bio Inc., Seoul, South Korea, 2Samsung Medical Center, South Korea, 3Samsung Medical Center, Sungkyunkwan University School of Medicine, Seoul, South Korea, 4Graduate School of Convergence Science and Technology, Seoul National University, Laboratory of Molecular Pathology and Cancer Genomics, College of Pharmacy and Research Institute of Pharmaceutical Sciences, Seoul National University, Seoul, South Korea, 5Graduate School of Convergence Science and Technology. Seoul National University, Logonebio-Convergence Research Foundation, Seoul, South Korea, 6Seoul, South Korea, 7Deep Bio Inc., Guro-gu, South Korea背景：免疫组化（IHC）通过检测癌症相关蛋白，在治疗策略的选择和预后评估中发挥了重要作用。由于靶蛋白也可以在非癌细胞中表达，因此在IHC定量中识别和指定可分析的肿瘤区域是至关重要的。利用人工智能（AI）自动识别肿瘤区域检测的研究实现了全自动和定量的IHC分析。然而，对于人工智能模型的开发来说，手动描绘大型组织（如切片）中的整个癌症区域仍然是一项艰巨任务。在本研究中，我们提出并评估了一种针对c-Met IHC染色的非小细胞肺癌（NSCLC）全玻片图像（WSIs）的癌症区域检测模型的半监督分类学习方法。 研究设计：共收集188例c-MET IHC染色的NSCLC WSIs，其中85例活检WSIs的肿瘤区域由病理专家进行注释。带注释的WSIs被分为模型开发集（67个WSIs）和测试集（18个WSIs），未注释的68个手术切除WSI用于我们的半监督方法。通过使用苏木素-DAB通道扰动等色彩增强来匹配被扰动的未注释的IHC染色图像的预测结果，从而提高了检测肿瘤区域的能力。我们将AI模型与传统的完全监督和建议方法进行训练和比较，以证明利用未注释的IHC染色图像的有效性。传统的方法只使用标注的图像来训练AI模型，而本文提出的方法同时使用带注释和未注释的图像。采用F1分数、每个类别（良性和肿瘤）的联合交集 (IoU) 以及平均 IoU (mIoU）来评价AI模型的肿瘤区域分割性能。 结果：表1显示了在传统的完全监督方法和本文所提方法中训练的AI模型的肿瘤区域分割性能。使用该方法的AI模型超越了使用完全监督方法的模型，F1得分为92分，mIoU为92.25%，比传统模型高出约2个百分点。图2显示，该方法在未见过的样本上的肿瘤区域预测方面表现出良好的性能。 结论：总之，我们开发了一种简单而有效的半监督学习方法，用于IHC染色图像的肿瘤区域分割深度学习模型。
Figure 1-1540
Figure 1-1541
1542：晚期非小细胞肺癌循环肿瘤DNA分析与组织检测的比较 1542：Comparison of Circulating Tumor DNA Analysis and Tissue Testing in Advanced Non-Small Cell Lung CancerIsa Jacoba1, Umit Tapan1, Pavel Kopach21Boston University School of Medicine/Boston Medical Center, Boston, MA, 2Boston University Mallory Pathology Associates, Boston, MA背景：目前实践指南建议对多种生物标志物进行广泛的分子分析，以识别可能受益于靶向治疗的晚期非小细胞肺癌（aNSCLC）患者。由于报道不一致，循环肿瘤DNA（ctDNA）在NSCLC中的应用的临床价值尚未明确。 研究设计：我们的研究旨在将 ctDNA 的下一代测序 (NGS) 与标准组织检测 (STBT) 进行比较，以确定指南建议的 aNSCLC 改变。所有患者根据突变情况，被分为组1（组织阳性-ctDNA阴性）、组2（组织阴性-ctDNA阳性）和组3（组织阳性-ctDNA阳性）。 结果：本研究共纳入28例患者。对初治患者的肿瘤进行STBT，在治疗期间随访/进展时采集血液进行ctDNA检测。研究包括13例（46%）女性患者和15例（54%）男性患者。中位年龄为62岁（范围为27-85岁）。16例（57%）患者曾有吸烟史，5例（18%）目前仍吸烟，7例（25%）从不吸烟。在确诊时，23例（82%）患者为临床T4，2例（7%）患者为T3，3例（11%）患者为T2，24例（86%）患者为转移性疾病。在组织学上，包括20例（71 %）腺癌，5例（17%）鳞状细胞癌，1例（4%）低分化癌，1例（4%）腺鳞癌和1例（4%）大细胞神经内分泌癌。所有患者均接受多线化疗。在本研究进行时，22例（79%）患者带病生存，3例（10%）患者无病生存，2例（7%）患者因疾病死亡，1例（4%）患者没有因疾病死亡的证据。第1组患者（n=11）的分子结果显示有4例（36%）EGFR突变，4例（36%）KRAS突变，2例（18%）BRAF突变，1例（9%）NTRK扩增。第2组患者（n=5）的结果显示有2例EGFR（40%）突变，2例（40%）KRAS突变，1例（20%）BRAF突变。最后，在第3组患者（n=15）中发现4例（27%）EGFR突变，4例（27%）KRAS突变，3例（20%）ALK融合，2例（13%）BRAF突变，1例（7%）RET融合，1例（7%）MET扩增。其他确定的显著变化包括TP53[组1/n=4（14%）；组2/n=7（25%）；组3/n=10（36%）、STK11（组1/n=1（4%）和组3/n=3（11%）和PMS2（组1/n=4（14%）]。 结论：初步研究表明，ctDNA和肿瘤组织NGS检测之间具有一定的相关性。当肿瘤组织受限时，ctDNA分析可作为辅助研究。 Figure 1-1542
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