覆盆子的化学成分及抗氧化活性研究

caimin133 2025-05-03

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覆盆子Rubi Fructus为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥未成熟果实，未成熟果实（绿果）作为中药覆盆子使用，而其成熟的果实（红果）作为水果覆盆子使用。2015年，覆盆子被列为药食同源品种。中药覆盆子性温，味酸、甘，归肝、肾、膀胱经，具有益肾固精缩尿、养肝明目的作用，可用于遗精滑精、遗尿尿频、阳痿早泄、目暗昏花^[1]。水果覆盆子营养丰富，口感酸甜，且安全性高，世界粮农组织将其推荐为世界第3代水果。2018年入选新“浙八味”培育品种，它的果实、叶芽、种子和果渣在药品、食品、保健品和化妆品领域应用广泛^[2]。近年来关于中药覆盆子化学成分的研究报道比较多，已经从覆盆子果实、叶片中得到了酚类、黄酮类、萜类、有机酸类、生物碱类、苯丙素类和香豆素类化合物，其具有抗氧化、抗骨质疏松、抗衰老、抗诱变、抗斑点、抗菌抗炎、调节免疫和肝保护作用^[3]。本课题对中药覆盆子开展了深入地化学成分研究，从20%正丁醇部位中分离得到了16个化合物，分别鉴定为1个木脂素类化合物：(赤式,赤式)-1-[4-[2-羟基-2-(4-羟基)-1-(羟甲基)乙氧基]-3-甲氧基苯基]-1,2,3-丙三醇[(erythro,erythro)-1-[4-[2-hydroxy-2-(4-hydroxy)-1-(hydroxymethyl)ethoxy]-3-methoxyphenyl]-1,2,3-propanetriol，1]；4个黄酮类化合物：(＋)-儿茶素-5-O-β-D-葡萄糖苷[(+)-catechin-5-O-β-D-glucoside，2]、(−)-儿茶素[(−)-catechin，5]、2-羟基柚皮素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2-hydroxynaringin-5-O-β-D-glucopyranoside，15）、香橙素-7-O-β-吡喃葡萄糖苷（aromadendrin-7-O-β-glucopyranoside，16）；3个酚酸类化合物：短叶苏木酚酸（brevifolin carboxylic acid，3）、3,4,5-三甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（3,4,5-trimethoxyphenyl-β-D-glucopyranoside，6）、2,4,6-三羟基苯乙酮-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2,4,6-trihydroxy-acetophenone-6-O-β-D-glucopyranoside，7）；4个苯丙素类化合物：3,4′-二羟基苯丙酮-3-β-D-葡萄糖苷（3,4′-dihydroxy- propiophenone-3-β-D-glucoside，8）、dichotomoside E（11）、二氢松柏醇（dihydroconiferyl alcohol，12）、二氢对香豆醇-γ-O-吡喃葡萄糖苷（dihydro-p-coumaryl alcohol γ-O-glucopyranoside，14]；3个苯乙醇/乙烯类化合物：trans-vaginoside （9）、cis-vaginoside（10）、2-苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷（2-phenylethyl-β-D-glucopyranoside，13）；1个倍半萜类化合物：(1′R,3′S,5′R,8′S,2Z,4E)-二氢菜豆酸-3′-O-β-D-葡萄糖苷[(1′R,3′S,5′R,8′S,2Z,4E)-dihydrophaseicacid 3′-O-β-D-glucopyranoside，4]。结构见图1。其中，化合物1为新化合物，命名为覆盆子脂素，化合物2、4～16均为首次从该植物中得到。覆盆子中的多酚类和黄酮类化合物被认为是其抗氧化活性的主要物质，且其含量和组成随果实成熟阶段显著变化^[4-5]。为了进一步研究覆盆子中化合物的抗氧化活性，开发具有抗氧化功能的食品和药物，本实验对分离得到的16个单体化合物的进行体外抗氧化活性评估。结果显示，酚酸类化合物和黄酮类化合物对DPPH自由基清除能力有良好的活性，其中化合物3、5、16的抗氧化能力比较显著。

1 仪器与材料

Bruker Avance 600 核磁共振仪、Bruker Avance 400核磁共振仪（德国布鲁克公司）；Q-TOF-Ultima 质谱仪（Milford，MA，美国）；BT 125D型分析天平（德国塞多利斯有限公司）；BSZ-100自动部分收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）；1260 Infinity 分析型高效液相色谱仪；1260 Infinity II半制备液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；ZORBAX SB-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；ZORBAX SB-C₁₈（250 mm×9.4 mm，5 μm）；Sephadex LH-20 凝胶（Pharmacia公司）；硅胶G（100～200、200～300、300～400目，上海泰坦科技股份有限公司）；MCI gel CHP-20P（日本Mitsubishi公司）；ODS-AQ-HG（50 μm）反相硅胶（日本YMC公司）；HSGF₂₅₄薄层色谱硅胶板、厚制备板（烟台江友硅胶开发有限公司）；石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇、醋酸（国药集团化学试剂有限公司，AR）；乙腈、甲醇（阿达玛斯试剂有限公司，HPLC纯）；纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。

覆盆子药材于2020年9月采购于宣城广德县，由上海中医药大学生药教研室倪梁红教授鉴定为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子R. chingii Hu的干燥果实，标本（FPZ20200901）保存于上海中医药大学中药学院中药化学教研室。

2 方法

2.1 提取与分离

干燥的覆盆子果实（50 kg）用80%乙醇加热回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩得浸膏11.9 kg。将浸膏分散在适量水中，依次用石油醚、二氯甲烷及正丁醇萃取，浓缩得到石油醚部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位和萃取后水层部位。正丁醇部位（1 300 g）采用D-101型大孔吸附树脂初步分离，依次以水及20%、40%、60%、80%、95%乙醇进行梯度洗脱，按不同体积分数乙醇洗脱部位浓缩合并得到6个组分Fr. B.1～B.6。Fr. B.2（221 g）经ODS反相柱色谱，以甲醇-水（5∶95→50∶50）梯度洗脱，得到15个组分Fr. B.2.1～B.2.15。Fr. B.2.4经正相硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（40∶1→1∶1）梯度洗脱，共得到18个组分Fr. B.2.4.1～B.2.4.18。Fr. B.2.4.16经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以甲醇-水（70∶30）等度洗脱，得到7个组分Fr. B.2.4.16.1～B.2.4.16.7。Fr.B.2.4.16.3经过半制备液相色谱[乙腈-水（5∶95→95∶5）]得到化合物1（2.0 mg）。Fr. B.2.4.16.6经半制备液相色谱，以乙腈-水（6∶94）等度洗脱得到化合物2（3.8 mg）。Fr. B.2.4.16.7经过结晶得到化合物3（3.8 mg）。Fr. B.2.4.16.1经硅胶柱色谱，以醋酸乙酯-甲醇（15∶1→1∶1）梯度洗脱和半制备液相色谱 [乙腈-0.1%甲酸水（10∶90）]等度洗脱得到化合物4（18.9 mg）。Fr. B.2.4.7～B.2.4.9合并后经ODS反相柱色谱，以甲醇-水（5∶95→40∶60）梯度洗脱，得到16个组分Fr. B.2.4.7.1～B.2.4.7.16。Fr. B.2.4.7.8～B.2.4.7.10合并后经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（20∶1→1∶1）梯度洗脱和半制备液相色谱，以乙腈-水（10∶90）等度洗脱得到化合物5（6.8 mg）。Fr. B.2.4.7.8.5～B.2.4.7.8.6合并以后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以甲醇-水（20∶80）等度洗脱得到化合物6（7.8 mg）。Fr. B.2.4.7.8.7～B.2.4.7.8.8合并以后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以甲醇-水（20∶80）等度洗脱，得到7个组分Fr. B.2.4.7.8.7.1～B.2.4.7.8.7.7，其中Fr. B.2.4.7.8.7.7为化合物7（13.1 mg）。Fr. B.2.4.7.8.7.4和Fr. B.2.4.7.8.7.5通过半制备液相色谱，以乙腈-水（10∶90）等度洗脱，分别得到化合物8（29.3 mg）、9（1.9 mg）和10（5.7 mg）。Fr. B.2.5经正相硅胶柱色谱，以醋酸乙酯-甲醇（100∶1→3∶1）梯度洗脱，共得到11个组分Fr. B.2.5.1～B.2.5.11。Fr. B.2.5.4经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以甲醇-水（30∶70）等度洗脱得到9个组分Fr. B.2.5.4.1～B.2.5.4.9。Fr. B.2.5.4.1经过ODS柱色谱，以甲醇-水（5∶95→35∶65）梯度洗脱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以甲醇-水（30∶70）等度洗脱得到化合物11（4.5 mg）。Fr. B.2.5.4.3经过半制备液相色谱，以乙腈-水（15∶85→16.5∶83.5）梯度洗脱得到化合物12（6.8 mg）和13（2.4 mg）。Fr. B.2.5.4.4经过ODS柱色谱，以甲醇-水（5∶95→30∶70）梯度洗脱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱甲醇-水（30∶70）等度洗脱得到化合物14（10.4 mg）。Fr. B.2.5.4.6和Fr. B.2.5.4.8分别为化合物15（63.8 mg）和16（10.0 mg）。

2.2 抗氧化活性实验

DPPH实验操作按照文献报道的方法^[6]进行改进，在96孔酶标板中加入50 μL不同浓度的样品，再加入200 μL含0.2 mmol/L的DPPH的甲醇溶液；空白对照组加入100 μL乙醇和150 μL的DPPH的甲醇溶液；待测样品空白对照组加入50 μL样品和200 μL不含DPPH的乙醇溶液，避光孵育30 min后测定517 nm下的吸光度（A）值，Vc为阳性对照组，实验重复3次，按公式计算DPPH自由基清除率。用SPSS软件计算IC₅₀值（清除50%DPPH自由基时样品浓度）。

自由基清除率＝1－(A_样品－A_{待测样品空白对照})/A_空白对照

3 结果

3.1 结构鉴定

化合物1：为棕色油状物，+11.7（c 0.1，MeOH）。(nm): 210, 230, 280。HR-ESI-MS m/z: 379.139 1 [M－H]^－（计算值379.139 8），结合¹³C-NMR数据推断其分子式为C₁₉H₂₄O₈，不饱和度为8。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)数据（表1）显示，有1个甲氧基氢信号δ_H 3.88 (3H, s)、5个苯环氢信号δ_H 7.24 (2H, d, J = 8.3 Hz), 7.07 (1H, s), 7.04 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6.88 (1H, d, J = 8.2 Hz), δ_H 6.74 (2H, d, J = 8.3 Hz)、2个亚甲基氢信号δ_H 3.70 (1H, dd, J = 11.9, 3.9 Hz), 3.44 (1H, m); 3.51 (1H, dt, J= 11.6, 3.4 Hz), 3.37 (1H, dd, J=11.6, 6.2 Hz)、4个次甲基氢信号δ_H 4.87 (1H, overlapped), 4.57 (1H, d, J = 5.8 Hz), 4.24 (1H, q, J = 5.2 Hz), 3.66 (1H, d, J = 4.5 Hz)。¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)数据（表1）显示该化合物有19个碳信号，结合DEPT135谱表明其包括1个甲氧基碳信号、2个亚甲基碳信号、4个次甲基碳信号、10个苯环碳信号，其中1组碳信号为δ_C 158.2、133.0、129.3、116.0（化合物A环），另一组碳信号为δ_C 151.6、149.0、138.0、120.6、119.1、112.3（化合物B环）。根据HMBC谱（图2）可得出，B苯环中甲氧基δ_C 56.5与δ_C151.6 (C-4′) 连接，次甲基δ_H 4.57 (1H, d, J = 5.8 Hz, H-7′) 分别与δ_C 138.0 (C-1′)，δ_C 112.3 (C-2′) 和δ_C 120.0 (C-6′) 以及次甲基δ_C 77.4 (C-8′)相关，同时H-8′与δ_C 64.2 (C-9′) 具有相关，结合¹H-¹H COSY谱中H-8′分别与H-7′和H-9′相关，得出B苯环C-1′位被1个C₃侧链取代。同理可发现A苯环中次甲基δ_H 4.87 (1H, overlapped, H-7) 分别与δ_C 133.0 (C-1)、δ_C 129.3 (C-2, 6) 和δ_C 87.6 (C-8) 相关，同时H-8与δ_C 61.8 (C-9) 具有相关，结合¹H-¹H COSY谱中H-8分别与H-7和H-9相关，可得出A苯环C-1位也被1个C₃侧链取代。在化合物1中，δ_H 4.24 (1H, q, J = 5.2 Hz, H-8) 与δ_C 149.0 (C-3′)具有明显的相关性，因此A苯环和B苯环以C-8/C-3′的方式进行连接，与文献中报道(erythro,erythro)-1-[4-[2-hydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-(hydroxymethyl) ethoxy]-3,5-dimethoxyphenyl]-1,2,3-propanetriol^[7]母核一致，属于木脂素类化合物，不同的是文献中的化合物中A苯环和B苯环以C-8/C-4′的方式进行连接。进一步分析NOESY谱（图2）发现H-7/H-8，H-7′/H-8′相关，表明化合物1的H-7和H-8在同一侧，H-7′和H-8′也在同一侧，结合文献报道^[8]H-7和H-8，H-7′和H-8′之间的偶合常数皆在5 Hz左右，因此H-7和H-8之间，H-7′和H-8′之间的构型为赤式、赤式。因此，化合物1的结构为(赤式,赤式)-1-[4-[2-羟基-2-(4-羟基)-1-(羟甲基)乙氧基]-3-甲氧基苯基]-1,2,3-丙三醇，基于上述分析及Sci-Finder检索，确定化合物1为1个新化合物，命名为覆盆子脂素。

化合物2：棕色固体。ESI-MSm/z: 453 [M＋H]^＋；分子式为C₂₁H₂₄O₁₁。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 6.82 (1H, s, H-2′), 6.75 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 6.70 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6′), 6.26 (1H, s, H-6), 6.02 (1H, s, H-8), 4.59 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-2), 3.97 (1H, q, J = 7.5 Hz, H-3), 3.90～3.40 (6H, m, H-2″～6″), 3.01 (1H, dd, J = 16.4, 5.4 Hz, H-4eq), 2.57 (1H, dd, J = 16.4, 8.1 Hz, H-4ax)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD) δ: 158.1 (C-7), 158.0 (C-5), 156.7 (C-9), 146.3 (C-3′, 4′), 132.1 (C-1′), 119.9 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.2 (C-2′), 103.4 (C-10), 102.5 (C-1″), 98.1 (C-8), 96.9 (C-6), 82.9 (C-2), 78.2 (C-5″), 78.1 (C-3″), 74.9 (C-2″), 71.3 (C-4″), 68.6 (C-3), 62.5 (C-6″), 28.4 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致^[9]，故鉴定化合物2为(+)-儿茶素-5-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3：黄色固体。ESI-MSm/z: 293 [M＋H]^＋；分子式为C₁₃H₈O₈。¹H-NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.51 (1H, s, COOH), 7.30 (1H, s, H-3′), 4.37 (1H, dd, J = 7.8, 1.8 Hz, H-4), 2.99 (1H, dd, J = 18.6, 7.8 Hz, H-5a), 2.44 (1H, dd, J = 18.6, 1.8 Hz, H-5b)；¹³C-NMR (150 MHz, DMSO-d₆) δ: 193.3 (C-1), 173.5 (COOH), 160.2 (C-7′), 149.6 (C-2), 145.7 (C-4′), 143.9 (C-6′), 140.2 (C-3), 139.1 (C-5′), 115.2 (C-2′), 113.1 (C-1′), 108.0 (C-3′), 40.9 (C-5), 37.5 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致^[10]，故鉴定化合物3为短叶苏木酚酸。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm/z: 467 [M＋Na]^＋；分子式为C₂₁H₃₂O₁₀。¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD)δ: 7.94 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-4), 6.49 (1H, d, J= 15.9 Hz, H-5), 5.78 (1H, s, H-2), 4.38 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1″), 4.25 (1H, tt, J = 10.4, 6.8 Hz, H-3′), 3.87 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-6″a), 3.81 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-7′a), 3.76 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-7′b), 3.67 (1H, dd, J = 12.0, 5.2 Hz, H-6″b), 3.15 (1H, dd, J = 9.1, 7.8 Hz, H-2″), 2.20 (1H, dd, J = 13.8, 6.9 Hz, H-4′a), 1.99 (1H, dd, J = 13.8, 6.9 Hz, H-4′b), 1.17 (3H, s, H-9′), 0.94 (3H, s, H-10′)；¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ: 150.1 (C-3), 134.4 (C-4), 132.0 (C-5), 120.6 (C-2), 103.0 (C-1″), 87.7 (C-5′), 83.2 (C-8′), 78.0 (C-5″), 77.9 (C-3″), 77.1 (C-7′), 75.0 (C-2″), 71.6 (C-4″), 62.7 (C-6″), 42.8 (C-2′), 42.7 (C-4′), 21.2 (C-6), 19.7 (C-9′), 16.3 (C-10′)。以上数据与文献报道基本一致^[11]，故鉴定化合物4为(1′R,3′S,5′R,8′S,2Z,4E)-二氢菜豆酸-3′-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：黄色粉末。ESI-MSm/z: 291 [M＋H]^＋；分子式为C₁₅H₁₄O₆。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 6.74 (1H, s, H-2′), 6.66 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5′), 6.62 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-6′), 5.82 (1H, s, H-8), 5.75 (1H, s, H-6), 4.46 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-2), 3.87 (1H, m, H-3), 2.75 (1H, dd, J = 16.1, 5.4 Hz, H-4a), 2.40 (1H, dd, J = 16.1, 8.2 Hz, H-4b′)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 157.8 (C-7), 157.6 (C-9), 156.9 (C-4′), 146.3 (C-5), 146.2 (C-3′), 132.2 (C-1′), 120.0 (C-5′), 116.1 (C-2′), 115.2 (C-6′), 100.8 (C-10), 96.3 (C-8), 95.5 (C-6), 82.9 (C-2), 68.8 (C-3), 28.5 (C-4)。以上数据与文献报道基本一致^[12]，故鉴定化合物5为(−)-儿茶素。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm/z: 369 [M＋Na]^＋；分子式为C₁₅H₂₂O₉。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 6.48 (2H, s, H-2, 6), 4.81 (1H, d,J = 7.3 Hz, H-1′), 3.91 (1H, dd, J = 12.0, 2.3 Hz, H-6′a), 3.80 (6H, s, 3, 5-OCH₃), 3.70 (3H, s, 4-OCH₃), 3.66 (1H, dd, J = 12.0, 6.6 Hz, H-6′b), 3.45～3.44 (4H, m, H-2′～5′)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 156.0 (C-1), 154.8 (C-3, 5), 134.4 (C-4), 103.2 (C-1′), 96.1 (C-2, 6), 78.4 (C-5′), 78.1 (C-3′), 74.9 (C-2′), 71.67 (C-4′), 62.7 (C-6′), 61.2 (4-OMe), 56.5 (3, 5-OMe)。以上数据与文献报道基本一致^[13]，故鉴定化合物6为3,4,5-三甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：浅黄色粉末。ESI-MS m/z: 353 [M＋Na]^＋；分子式为C₁₄H₁₈O₉。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 6.18 (1H, d, J = 2.3 Hz, H-5), 5.94 (1H, d, J= 2.3 Hz, H-3), 5.02 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1′), 3.91 (1H, dd, J = 12.1, 2.1 Hz, H-6′a), 3.72 (1H, dd, J = 12.1, 2.1 Hz, H-6′b), 3.53～3.41 (4H, m, H-2′～5′), 2.69 (3H, s, 1-CH₃)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 204.8 (1-C=O), 167.7 (C-4), 166.3 (C-2), 162.6 (C-6), 106.8 (C-1), 102.0 (C-1′), 98.2 (C-3), 95.4 (C-5), 78.5 (C-3′), 78.4 (C-5′), 74.7 (C-2′), 71.1 (C-4′), 62.4 (C-6′), 33.5 (1-CH₃)。以上数据与文献报道基本一致^[14]，故鉴定化合物7为2,4,6-三羟基苯乙酮-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z: 351 [M＋Na]^＋；分子式为C₁₅H₂₀O₈。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 7.91 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.84 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-3′, 5′), 4.31 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1″), 4.25 (1H, dt, J = 10.1, 6.4 Hz, H-2a), 3.98 (1H, dt, J = 10.1, 6.4 Hz, H-2b), 3.83 (1H, dd, J = 11.9, 1.7 Hz, H-6″a), 3.65 (1H, dd, J = 11.9, 5.2 Hz, H-6″b), 3.15 (1H, dd, J = 9.2, 7.8 Hz, H-2″)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 199.3 (C-1), 164.2 (C-4′), 132.0 (C-2′, 6′), 130.0 (C-1′), 116.3 (C-3′, 5′), 104.6 (C-1″), 78.0 (C-3″), 77.9 (C-5″), 75.0 (C-4″), 71.6 (C-2″), 66.4 (C-3), 62.7 (C-6″), 39.4 (C-2)。以上数据与文献报道基本一致^[15]，故鉴定化合物8为3,4′-二羟基苯丙酮-3-β-D-葡萄糖苷。

化合物9：淡黄色粉末。ESI-MS m/z: 343 [M＋COOH]^－；分子式为C₁₄H₁₈O₇。1H-NMR (600 MHz, D₂O)δ: 7.35 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2′, 6′), 7.18 (1H, d, J = 12.7 Hz, H-1), 6.95 (2H, d, J= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.28 (1H, d, J = 12.7 Hz, H-2), 4.02 (1H, dd, J = 12.4, 2.2 Hz, H-6′a), 3.84 (1H, dd, J= 12.4, 2.2 Hz, H-6′b), 3.65～3.55 (4H, m, H-2′～5′)；¹³C-NMR (150 MHz, D₂O)δ: 154.3 (C-4′), 143.8 (C-1), 127.3 (C-1′), 127.0 (C-2′, 6′), 115.7 (C-3′, 5′), 110.7 (C-1), 101.6 (C-1″), 76.3 (C-3″), 75.5 (C-5″), 72.7 (C-2″), 69.4 (C-4″), 60.5 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致^[16]，故鉴定化合物9为trans-vaginoside。

化合物10：淡黄色粉末。ESI-MSm/z: 343 [M＋COOH]^－；分子式为C₁₄H₁₈O₇。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 7.45 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.69 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3′, 5′), 6.37 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-1), 5.27 (1H, d, J= 7.1 Hz, H-2), 4.62 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-1′), 3.87 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-6′a), 3.69 (1H, dd, J = 12.0, 5.1 Hz, H-6′b), 3.41～3.36 (4H, m, H-2′～5′)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 156.7 (C-4′), 143.3 (C-1), 131.0 (C-2′, 6′), 128.6 (C-1′), 115.8 (C-3′, 5′), 108.4 (C-2), 105.0 (C-1″), 78.5 (C-3″), 78.1 (C-5″), 74.8 (C-2″), 71.2 (C-4″), 62.5 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致^[16]，故鉴定化合物10为cis-vaginoside。

化合物11：白色粉末。ESI-MS m/z: 453 [M＋K]^＋；分子式为C₂₀H₃₀O₉。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 7.07 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5), 6.87 (1H, d, J= 2.1 Hz, H-2), 6.74 (1H, dd, J = 8.2, 2.1 Hz, H-6), 3.84 (3H, s, 3-OCH₃), 2.87 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-7), 2.61 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-8), 0.91 (3H, d, J = 7.6 Hz, H-4″)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD) δ: 174.5 (C-9), 150.8 (C-3), 144.4 (C-4), 136.5 (C-1), 121.4 (C-6), 117.7 (C-5), 112.7 (C-2), 103.0 (C-1′), 78.2 (C-3′), 77.9 (C-5′), 75.0 (C-2′), 71.4 (C-4′), 62.5 (C-6′), 56.7 (3-COOCH₃), 36.8 (C-8), 31.8 (C-7), 20.7 (C-13), 14.4 (C-14)。以上数据与文献报道基本一致^[17]，故鉴定化合物11为dichotomoside E。

化合物12：淡黄色固体。ESI-MSm/z: 362 [M＋NH₄]^＋；分子式为C₁₆H₂₄O₈。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 6.79 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2), 6.69 (1H, d, J= 8.0 Hz, H-5), 6.64 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6), 4.24 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1′), 3.91 (1H, dt, J = 9.6, 6.3 Hz, H-9a), 3.85 (1H, dd, J = 11.9, 2.3 Hz, H-6′a), 3.83 (3H, s, 3-OCH₃), 3.66 (1H, dd, J = 11.9, 5.6 Hz, H-6′b), 3.52 (1H, dt, J = 9.6, 6.6 Hz, H-9b), 2.63 (2H, t, J = 7.8 Hz, H-7), 3.36～3.20 (4H, m, H-2′～5′), 1.88 (2H, m, H-8)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD) δ: 148.8 (C-3), 145.5 (C-4), 134.9 (C-1), 121.9 (C-6), 116.1 (C-5), 113.3 (C-2), 104.5 (C-1′), 78.1 (C-3′), 77.9 (C-5′), 75.2 (C-2′), 71.7 (C-4′), 70.0 (C-9), 62.8 (C-6′), 56.4 (3-OCH₃), 32.9 (C-7), 32.7 (C-8)。以上数据与文献报道基本一致^[18]，故鉴定化合物12为二氢松柏醇。

化合物13：白色粉末。ESI-MS m/z: 285 [M＋H]^＋；分子式为C₁₄H₂₀O₆。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 7.25 (4H, d, J = 4.4 Hz, H-2′, 3′, 5′, 6′), 7.17 (1H, m, H-4′), 4.30 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1″), 4.09 (1H, dd, J = 16.5, 8.1 Hz, H-1a), 3.86 (1H, dd, J = 11.9, 2.0 Hz, H-6″a), 3.75 (1H, dd, J = 16.5, 8.1 Hz, H-1b), 3.66 (1H, dd, J = 11.9, 5.3 Hz, H-6″b), 3.34～3.17 (4H, m, H-2″～5″), 2.93 (2H, ddd, J = 8.0, 6.7, 3.4 Hz, H-2)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 140.1 (C-1′), 130.0 (C-3′, 5′), 129.3 (C-2′, 6′), 127.2 (C-4′), 104.4 (C-1″), 78.1 (C-3″), 78.0 (C-5″), 75.1 (C-2″), 71.7 (C-1), 71.6 (C-4″), 62.8 (C-6″), 37.2 (C-2)。以上数据与文献报道基本一致^[19]，故鉴定化合物13为2-苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物14：白色粉末。ESI-MS m/z: 359 [M＋COOH]^－；分子式为C₁₅H₂₂O₇。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 7.02 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2, 6), 6.68 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-3, 5), 4.24 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1′), 3.90 (1H, dt, J = 9.6, 6.5 Hz, H-9a), 3.85 (1H, dd, J = 11.9, 2.3 Hz, H-6′a), 3.67 (1H, dd, J = 11.9, 2.3 Hz, H-6′b), 3.52 (1H, dt, J = 9.6, 6.5 Hz, H-9b), 3.35～3.19 (4H, m, H-2′～5′), 2.61 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-7), 1.87 (1H, m, H-8)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD)δ: 156.4 (C-4), 134.1 (C-1), 130.4 (C-2, 6), 116.1 (C-3, 5), 104.5 (C-1′), 78.1 (C-3′), 77.9 (C-5′), 75.2 (C-2′), 71.7 (C-4′), 70.1 (C-9), 62.8 (C-6′), 32.9 (C-7), 32.2 (C-8)。以上数据与文献报道基本一致^[18]，故鉴定化合物14为二氢对香豆醇-γ-O-吡喃葡萄糖苷。

化合物15：白色粉末。ESI-MS m/z: 449 [M－H]^－；分子式为C₂₁H₂₂O₁₁。¹H-NMR (600 MHz, CD₃OD)δ: 6.99 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.56 (2H, t, J = 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.03 (1H, dd, J = 3.7, 1.7 Hz, H-6), 5.92 (1H, s, H-8), 3.86 (1H, dd, J = 12.0, 2.1 Hz, H-6″a), 3.67 (1H, m, H-6″b), 3.52～3.34 (4H, m, H-2″～5″), 3.07 (2H, s, H-3)；¹³C-NMR (150 MHz, CD₃OD) δ: 196.8 (C-4), 174.6 (C-9), 172.1 (C-7), 158.4 (C-5), 157.3 (C-4′), 132.5 (C-2′, 6′), 125.6 (C-1′), 115.8 (C-3′, 5′), 107.6 (C-2), 103.3 (C-10), 101.7 (C-1″), 97.6 (C-6), 93.3 (C-8), 78.4 (C-3″), 77.3 (C-5″), 74.0 (C-2″), 71.2 (C-4″), 62.3 (C-6″), 42.0 (C-3)。以上数据与文献报道基本一致^[20]，故鉴定化合物15为2-羟基柚皮素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物16：黄色粉末。ESI-MSm/z:451 [M＋H]^＋；分子式为C₂₂H₂₆O₁₀。¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD)δ: 7.35 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.23 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-6), 6.20 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-8), 4.60 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1″), 3.86 (1H, m, H-6″a), 3.67 (1H, m, H-6″b), 3.44～3.34 (4H, m, H-2″～5″)；¹³C-NMR (100 MHz, CD₃OD) δ: 201.9 (C-4), 167.3 (C-7), 164.8 (C-9), 163.4 (C-5), 160.5 (C-4′), 129.8 (C-2′, 6′), 129.1 (C-4′), 116.1 (C-3′, 5′), 103.5 (C-10), 101.3 (C-1″), 98.3 (C-6), 97.0 (C-8), 85.8 (C-2), 78.3 (C-5″), 77.8 (C-3″), 74.6 (C-2″), 73.8 (C-3), 71.1 (C-4″), 62.8 (C-6″)。以上数据与文献报道基本一致^[21]，故鉴定化合物16为香橙素-7-O-β-吡喃葡萄糖苷。

3.2 抗氧化活性结果

16个单体化合物的DPPH自由基活性测试结果显示（表2），化合物3、5、6、7、13、16具有抗氧化活性，而其他化合物不具有抗氧化活性（IC₅₀＞50 mmol/L），其中酚酸类化合物对DPPH自由基抗氧化测试具有较好的活性，其次是黄酮类化合物，也具有明显的抗氧化活性。化合物3、5、16对DPPH自由基的清除能力随着质量浓度的增加而增加，呈明显量效关系，IC₅₀分别为5.83、1.13、8.46 μmol/L。

4 讨论

本实验采用多种色谱方法从华东覆盆子的正丁醇萃取部位分离得到16个化合物，其中化合物1为木脂素类新化合物，命名为覆盆子脂素，化合物2、5、15、16为黄酮类化合物，3、6、7为酚酸类化合物，8、11、12、14为苯丙素类化合物，9、10、13为苯乙醇/乙烯类化合物，除此之外还有1个倍半萜类化合物（4），其中化合物2、4～16均为首次从该植物中得到。本实验进一步对化合物进行了抗氧化活性评估，结果显示酚酸类化合物和黄酮类化合物对DPPH的清除能力较强，其中化合物3、5、16具有明显的抗氧化活性。本研究的结果丰富了覆盆子的化学成分和抗氧化性活性研究，为覆盆子抗氧化的药效物质基础及开发奠定了基础。