| 共 16 篇文章 |
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常见限制性内切酶识别序列(酶切位点),保护碱基,缓冲液常见限制性内切酶识别序列(酶切位点),保护碱基,缓冲液。The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes.ApaI （类型：Type II restriction enzyme ） 识别序列： 5''GGGCC^C 3''... 阅6276 转40 评0 公众公开 12-06-30 22:01 |
酶切的问题DNA酶切及凝胶电泳DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然... 阅1546 转23 评0 公众公开 12-01-12 21:38 |
酶切反应条件的优化。比如如何在正确的反应体系中，加入适量的DNA、内切酶和缓冲液，就可以获得最佳酶切效果。可加入过量的酶以缩短反应时间，或者使用能够快速酶切的内切酶。加入了内切酶的对照DNA（含有多个已知内切酶切割位点的DNA，如LambdaDNA或腺病毒-2DNA），以检测内切酶的活性。如果对照DNA能够被切割而实验中的底物DNA不能，可以将这... 阅1657 转25 评0 公众公开 12-01-02 15:26 |
dam甲基化酶识别GATC位点并甲基化；如果真是避免不了或者后来才发现问题，那么把甲基化的质粒转化到甲基化酶缺陷型大肠杆菌中再提质粒就没有甲基化，可以切了。需注意如下几点：①如果是双酶切A和B，预实验中必须做A和B各自的单酶切和A+B的双酶切,好确认这几种酶都好用，质粒上的切点都好用。造成回收质量差的原因可能是回收这步，也可能是酶切... 阅1571 转52 评0 公众公开 11-05-17 13:58 |
连接双酶切 连接双酶切。首先要保证待测质粒的纯度,除PCR外,可以对重组质粒做两个双酶切反应：1.ECoR I与Xh0 I双酶切; 2.选一个插入片段中特异存在的切点酶和质粒ECoRI下游到Xba1间的合适位点酶(插入片段中没有的),进行双切,结果 可以预测到.每个双切反应包括酶1单切,酶2单切,双切三个反应,别忘了以空载体做对照.试试看.如果没有得到重组质粒只... 阅5592 转42 评0 公众公开 11-05-09 20:13 |
双酶切连接反应之全攻略双酶切连接反应之全攻略前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公... 阅2474 转39 评1 公众公开 11-05-09 20:08 |
凝胶电泳常见问题分析要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢?参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照.2、 电泳条件不合... 阅12503 转78 评0 公众公开 11-04-28 09:12 |
质粒提取常见问题分析。■ 未提出质粒或质粒得率较低：对低拷贝数质粒，提取时，可加倍使用溶液P1、P2和P3，可能 有助于增加质粒提取量和质粒质量。△ 质粒未全部溶解（尤其质粒较大时） 洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。△ 含大量核酸酶的宿主菌 宿主菌含大量核酸酶，在质粒提取过程中降解质粒DNA，影响提取质... 阅1233 转26 评0 公众公开 11-04-20 21:15 |
双酶切连接反应全攻略双酶切连接反应之全攻略 前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公... 阅379 转10 评0 公众公开 11-04-11 13:34 |
【连接转化讨论专栏】各位分生研究高手:你们好!我将目的基因(1911bp)与 pcDNA3.1连接,用T4DNA连接酶,目的基因与载体的浓度比相等,目的基因与载体均采用两步酶切(Xbal 1 和EcoR 1酶)法,37度,16h.因pcDNA3.1载体无蓝白筛选,只好盲挑克隆菌株,但已经克隆了7次,均未成功.急请高人指导!多谢!多谢!!!!我的经验是目的基因的比例一定要大，应为质粒的3... 阅3372 转16 评0 公众公开 11-04-11 13:31 |
