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RT-PCR常见问题答疑解惑问 题 可能原因 建议解决方法 RT-PCR灵敏度:在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物 RNA被降解 在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA在将组织从动物体取出后立刻处理在100%甲酰胺中储存RNA如果使用胎盘RNase抑制剂,不要加热超过45℃或pH超过8.0,否则抑制剂或释放所有结合的RN...
RT-PCR Protocol一、实验器具与材料:1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头:1ml、200μl、20μl3、匀浆管:5ml4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个5、EP管:1.5ml、0.2ml6、量筒:50ml、250ml、500ml7、容量瓶:250ml、500ml、1000ml8、盐水瓶:250ml、500ml各2个备用,一个装无水乙醇,另一个装DEPC水9、铝制饭...
影响PCR 结果的因素(1) 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一...
揭开美国顶尖生物医学实验室成功的法宝。一般在每次实验室会议结束之时会有一个不到五分钟的实验室管理上的讨论,这时多数是实验室主任提几个试验或者仪器方面的注意事项,但一般非常简短,Steve一般不会过多干预,仅问问解决方案是什么。哈佛医学院遗传学系每周安排某个实验室出一个讲演者汇报课题进展,演讲内容基本上是代表了这个实验室的最...
如何向老外要文献的几种模板我想我把我的大致的思路说给你听首先称呼Dear Professor ...,然后解释写信的目的, 不过你先得说说你为什么要文献,而且最好夸一下他的文献是多么好或者对你多么有用,你实在是找不到才不得已写信找他要的不然就会使你很冒昧总之加油啦。Dear Meng-Meng, I attach the Word file that you asked for.
采用PCR的方式扩增目标片断具有以下优点:1. 微量的样品也可进行测序反应2. 操作简便3. 缩短了测序样品的准备时间。如果实验者提供的是质粒或者是纯化后的PCR产物,则需要说明其浓度和溶解的方式(原因如上) 2. 不同样品的说明: (1)PCR产物:若是PCR产物进行测序时,需要实验者同时提供PCR的双向引物各10ul(浓度>5uM/ul),这是...
实验人员需要养成的好习惯1、从冰箱中拿出一个EP管,发现上面只有一个数字,打破脑袋也想不起来这个数字的意思;提高个人实验素质培养良好的实验习惯可以起到事半工倍的作用,例如:1、实验前多想想,不要着急动手,明确实验性质和目的,设计好实验方案,在脑子里把全部的实验过程播放一遍,尽量做到一次成功,要学习美国人的精神,尽一切努力...
采用PCR的方式扩增目标片断具有以下优点:1. 微量的样品也可进行测序反应2. 操作简便3. 缩短了测序样品的准备时间。如果实验者提供的是质粒或者是纯化后的PCR产物,则需要说明其浓度和溶解的方式(原因如上) 2. 不同样品的说明: (1)PCR产物:若是PCR产物进行测序时,需要实验者同时提供PCR的双向引物各10ul(浓度>5uM/ul),这是...
这篇文章的作者——弗吉尼亚大学微生物系的Martin A. Schwartz(著名生物学家,最早发现细胞脱落凋亡(Anoikis)现象)以叙事的方式讲述了自身在科学研究中的亲身感受,一方面强调了傻劲(stupidity)在科学研究中的重要性,见解独到、别具匠心,另一方面对博士生培养中存在的问题进行了一针见血的陈列。我依然记得那一天, Henry Taube告诉我...
高效液相色谱(HPLC)使用中常见故障及解决方法(三)峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题,在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。解决方法:系统未进样或样品分解;解决方法:样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;样品浓度过高;解决方法:进...
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