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二代测序方法:DNA测序之靶向重测序二代测序方法:DNA测序之靶向重测序 - 目录。相较全基因组测序和全外显子测序,靶向测序能够聚焦所关注的区域,去除冗余数据的干扰,同时最大限度地利用测序reads,测序成本低且测序深度深,尤其适用于在临床应用中样本量少时的选择。可对众多样本的预定基因变异区域测序。参考阅读:二代测序方法集锦(二)...
mRNA分离:mRNA的3’端有Poly A结构,利用Oligo dT磁珠将mRNA从总RNA中拉出来。imageDNA探针去除法I:根据rRNA序列设计特异性DNA探针,将探针与总RNA混合后进行退火延伸,rRNA会形成DNA/RNA双连结构,利用RNAase H降解嵌合链中RNA,再用DNA酶降解DNA探针,剩下mRNA及LncRNA建库流程与mRNA建库流程一致,此法也是基于rRNA序列,不同物种使用不同...
NGS005 NGS方法小结1 测序方法分类测序方法分类2 基因组测序2.1 全基因组测序。链特异性文库和常规mRNA文库最大的区别在于合成第二链cDNA时加入的核苷酸种类,如果要构建常规mRNA文库,则加入dNTP,而如果要构建链特异性mRNA文库则加入dNTP中使用dUTP代替dTTP,这样合成的第二链cDNA含有U碱基,后期再通过识别U碱基的方法去除第二链cDNA,从而...
第二代测序技术(东拼西凑的课程论文)_FantasyJ_新浪博客第二代测序技术(东拼西凑的课程论文)(2010-03-28 00:37:28)Illumina/Solexa Genome Analyzer测序的基本原理是边合成变测序。目前一些模式生物的全基因组重测序、非模式生物的全基因组测序以及一些生物的转录组测序都采用了新一代测序技术,比如说前不久刚发表的熊猫的全基因组(Ruiqian ...
NGS实验室建设经验分享。·不建议使用内循环的家用空调系统。·暖通空调系统的节能设计。·测序仪室独立设置空调系统。·基因测序操作步骤繁多。暖通空调系统。–排风:扩增的核酸片段主要靠排风系统清除。测序平台落地。·选择合适的测序仪。·建立实验操作SOP、室内质控SOP、LDT文件等。·法 NGS、MLPA、Sang...
文库测序十问十答。而HiSeq X平台的index5、Read2测序则是在末端翻转后进行的,因此index5的测序方向与Read2一致,而与Read1、index7相反,同样的index5在HiSeq X和NovaSeq 6000平台测得的序列是反向互补的,因此在填写文库信息的时候一定要注意测序平台和序列的对应关系。常见的碱基不平衡文库有BS甲基化文库、单细胞转录组文库、PCR产物文库...
而HiSeq X平台的index5、Read2测序则是在末端翻转后进行的,因此index5的测序方向与Read2一致,而与Read1、index7相反,同样的index5在HiSeq X和NovaSeq 6000平台测得的序列是反向互补的,因此在填写文库信息的时候一定要注意测序平台和序列的对应关系。常见的碱基不平衡文库有BS甲基化文库、单细胞转录组文库、PCR产物文库等,为了减少碱基不...
高通量测序原理篇-Illumina测序原理1.它的化学修饰,主要是2种DNA引物,把它(2种DNA引物)种在玻璃表面,这2种引物和接下来要测序的DNA文库的接头序列相互互补的,而且这两种引物是通过共价键连到Flowcell上去,之所以要有共价键连到Flowcell上,是因为有接下来有大量的液体要流过这个Flowcell。所谓的DNA文库,实际上是许多个DNA片段,在两头...
NGS建库实验系列——DNA-seq.本世纪初高通量测序技术(high throughput sequencing, HTS,后期等同于NGS)兴起,经过几年的技术革新和市场筛选,Illumina公司的Solexa合成测序技术力拔头筹,在市场占有上完胜Roche公司454焦磷酸测序和ABI的SOLiD连接法测序,后推出的HiSeq平台可谓异军突起,成为现阶段二代测序的主力军,因此本系列的实验技术...
高通量测序原理篇-Ion Torrent测序原理篇1.Ion Torrent测序平台的测序仪也是当今非常红火的测序平台,其半导体测序技术同时也是分析肿瘤相关样本的一种非常有效的手段,从今天开始会像大家系列介绍Ion Torrent平台的测序技术。X接头和A接头的差别是带有Barcode序列的,而A接头是不带有Barcode序列的。在Ion Torrent测序当中,AmpliSeq文库是一...
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