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二、缓冲液
免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。
1、0.2mol/L（pH7.4）磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer， PB）
试剂： NaH2PO4•2H2O
Na2HPO4•12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g（或 NaH2PO4•H2O 27.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4•12H2O 71.632g（或 Na2HPO4•7H2O 53.6g或 Na2HPO4•2H2O35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4•12H2O，充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4~7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
2、0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（Phosphate Buffered Saline， PBS）
试剂：
| 0.2mol/L PB |
50ml |
| NaCl |
8.5~9g（约0.15mol/L） |
| 重蒸水 |
至1000ml |
配制方法：称取NaCl 8.5~9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25~7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/l PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。
3、Karasson -Schwlt’s磷酸盐缓冲液
试剂：
| NaH2PO4•H2O |
3.31g |
| Na2HPO4•7H2O |
33.77g |
| 重蒸水 |
至1000ml |
配制方法：同前
该缓冲液主要用于配制Zamboni‘s固定液。
4、0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液
试剂：
| Tris（三羟甲基氨基甲烷） |
60.57g |
| 1N HCl |
约420ml |
| 重蒸水 |
至1000ml |
配制方法：先以少量重蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。
5、Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered，Saline，TBS）
试剂：
| 0.5mol/L Tris-HCl缓冲液 |
100ml |
| NaCl |
3.5~9g（0.15mol/L） |
| 重蒸水 |
至1000ml |
配制：先以重蒸水少许溶解NaCl，再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。
TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。
6、Tris-TBS（PBS）
试剂：
| Triton X-100 |
10ml（1%）或3ml（0.3%） |
| 0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6） |
1000ml（50ml）或（0.2mol/L的PB） |
| NaCl |
8.5~9g |
| 重蒸水 |
至1000ml |
配制方法：先以重蒸水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀。
该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。
7、0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸缓冲液
试剂：
| 0.2mol/L二甲胂酸钠 |
500ml |
| 0.1N HCl |
28ml |
| 蒸馏水 |
至1000ml |
配制方法：先称取二甲胂酸钠（MW：214）42.8g，加蒸馏水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液；再取HCl 1.7ml加蒸馏水至1000ml ，配成0.1N，最后 取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合，加蒸馏水至1000ml，即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。
8、几种常用的不同pH值缓冲液的配制表
（1）0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7~8.0）
（2）0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH7.19~9.10）
（3）0.2mol/L醋酸盐缓冲液（pH3.6~5.6）
注：HCI可由NCO3代替，配制成二甲胂酸钠-HNO3缓冲液。
（5）0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2~10.7）
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