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分子生物学试验所用水都是去离子水ddH2O双蒸水级别的，所以器皿都要用去离子水冲洗两三遍；配制好试剂的贴标签标注，包括试剂名称、配制日期、配制人；加热和搅拌可以促溶解。 DNA电泳试剂
50×Tris-乙酸（TAE，pH=8.5）缓冲液 1. 准确称量各物质，确保缓冲液处于最佳状态。 2. 不要用Tris缓冲液来配制2mol/L Tris，因为常见的Tris缓冲液用了HCl调节pH，成了Tris-HCl缓冲液，使用纯Tris，配制Tris-乙酸缓冲液。 蛋白SDS－PAGE电泳试剂 10×Tris-甘氨酸缓冲液 成分 配制100mL溶液用量1 L Tris 30.2 g 甘氨酸 188 g SDS 10g 使用时稀释10倍使用 Western Blotting 10×转膜缓冲液（10×running buffer） (定容至1L) Tris 30.3g 甘氨酸 144g 不调pH 使用时稀释10倍使用 1×转膜工作液 (定容至1L，4℃保存)（现配现用） 10×转膜缓冲液 100ml 无水甲醇 200ml ddH2O 700ml 10×TBS 缓冲液（1L） Tris-HCl 24.3g NaCl 88g 用浓盐酸约14ml调节pH值至约7.4（pH试纸检测即可） 1×TBST TBS+Tween-20 0.1%（1ml for 1L） LB培养基 将下列组分溶解在0.9L ddH2O中：
2×YT培养基 将下列组分溶解在0.9L ddH2O中：
如需用4M NaOH（约0.5mL）调整pH至7.0，再补足水至1L。分装于锥形瓶并用封口膜进行封口，121℃灭菌20min，4℃保存。 细菌LB固体培养基 在LB液体培养基的基础上，加入1.5g/100ml琼脂粉Agar， 121℃灭菌20min，降温到60℃，稍微烫手，加入抗生素迅速倒平板，每个10cm平板大约倒10ml，4℃保存三个月。 氨苄青霉素（Amp）（100mg/mL） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的ddH2O中，定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以常50ug/mL终浓度添加于生长培养基。 卡那霉素（kan）（10mg/mL） 溶解100mg卡那霉素于足量的ddH2O中，定容至10mL。分装成小份于-20℃贮存。常以50ug/mL终浓度添加于生长培养基。 1.以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理，用ddH2O配的用0.45或0.22um无菌过滤器过滤除菌。 2.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存，也可用锡箔纸包裹。 3.抗生素配制出以后4℃可保存3个月，-20℃可保存一年。 RIPA裂解液 成分及终浓度 配制500mL溶液用量 50mM Tris（PH7.5） 3.02g 150mM NaCl 4.38g 1%TritonX-100 5ml 1%脱氧胆酸钠 5g 0.1%SDS 0.5g ddH2O至 500ml，调pH值至7.5。混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。 5M NaCl 称取29.22g氯化钠于100mL烧杯中，加入约80mL ddH2O加热搅拌溶解，定容至100mL，高温高压灭菌后使用，4℃保存。 0.5M EDTA(pH8.0)溶液 在80mL ddH2O中加入18.612g EDTA-Na2·2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需2.2g NaOH颗粒）然后定容至100mL，分装后高温高压灭菌备用。室温长期保存。 EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。而且配制时最好使用EDTA钠盐（其较易溶于水，而EDTA较难溶于水，易溶于有机溶剂）。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA) 加100mg BSA于9.5ml ddH2O中，定容到10ml，分装贮存于-20℃。 1M二硫苏糖醇（DTT） 在DTT 5g的原装瓶中加32.4ml ddH2O，分成贮存于-20℃。 1M HEPES 将23.8gHEPES溶于约90ml的ddH2O中，用NaOH调pH（6.8-8.2），定容至100ml。 1M HCl 加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的ddH2O中。 25mg/ml IPTG 溶解250mg的IPTG于10ml ddH2O中，分装贮存于-20℃。 1M MgCl2 溶解20.3g MgCl2·6H2O于ddH2O中，定容到100ml。 100mM PMSF 溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml，分装避光贮存于-20℃。 1.PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 2. PMSF在水溶液中不稳定。 1％溴酚蓝（bromophenol blue） 加1g溴酚蓝于100ml ddH2O中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 4X上样缓冲液 成分及终浓度 配制10mL溶液用量 1.0 mol/L Tris·HCl（pH6.8） 2ml 2%SDS 0.8g 0.1%溴酚蓝 0.04g 10%甘油 4ml ddH2O定容至10ml。混匀分装4℃保存。使用时稀释成1X，加入1M DTT（10X），例如：上样量20μl--4X上样缓冲液 5μl+ DTT 2μl + 样本蛋白13μl。SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性。溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的永久保存。 |
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