PMSF蛋白酶抑制剂(100 mmol/L)
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μl mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。 RIPA蛋白裂解液(100 mL ) Triton X-100 1 mL Tris.ClpH6.8 0.5 mol/L 10 mL EDTA 29.225mg (或EDTA.2Na 37.224 mg) SDS 0.1g 脱氧胆酸钠 1 g NaCl 0.876 g 使用之前,每1 mL上述溶液中,加PMSF 5μL, cocktail 10μL。 考马斯亮蓝染色液(100 mL) 在甲醇:水:冰乙酸体积比为45:45:10,共100ml中加入0.25g的考马斯亮蓝R-250。 脱色液(30%甲醇100mL) 30 mL 甲醇 + 10 mL 冰乙酸+ 60 mL H2O。 Trypsin(胰酶)(0.25%)
EGF 储液2ng/μL:10μLEGF (200 μg/mL)加入1mL 含0.1% BSA的10mmol/L乙酸中; 工作液10ng/mL: 10μL储液加入到2mL培养液中。 BSA(蛋白标准) 1%BSA=10mg/mL=0.145 mmol/L 0.1%BSA=1mg/ml TBS 10×TBS: Tris.Base 24.23 g NaCl 80.06g 定容到800 mL,用浓HCl调到pH7.6,再定容到1 L。 1×TBST:用10×TBS稀释10倍,并加入0.1%(v/v)Tween 2.0。 结晶紫(1%)
10×TAE Tris 48.4 g 冰乙酸 11.42mL EDTA 0.5 mol/L 20 mL (或称取2.9225 g) 加水至1 L, 调pH8.0。 双抗培养液 青霉素:100 U/mL 链霉素:100 U/mL。 10×SDS-PAGE电泳缓冲液(1L) Tris 30g 甘氨酸 144g SDS 10g 0.5M Tris-HCl(pH6.8,250ml,4℃保存) Tris15.125g,HCl调节pH至6.8. 1.5M Tris-HCl(pH8.8,250ml。4℃保存) Tris 45.5g,HCl调节pH至8.8. 甘氨酸缓冲液(250ml) 甘氨酸 0.938g NaCl 2.194g HCl调节pH至2.5,室温保存 4×Tris-Cl/SDS(pH6.8,100ml) Tris 6.05g HCl调节pH至6.8,过滤后家0.4g SDS,4℃保存 2×蛋白上样缓冲液(loadingbuffer,100ml) 4×Tris-Cl/SDS,pH6.8 25ml 甘油 20ml SDS 4g 溴酚蓝 0.2g DTT 3.1g 1ml分装,-70℃保存 转膜缓冲液(1 L) Tris 3.07 g 甘氨酸 14.4 g 甲醇 100 mL 先用去离子水将固体溶解后,临用前加甲醇并定容至1L。 SDS (10%) SDS 10 g 去离子水 100 ml Stripper Buffer(pH2.0,1L) 甘氨酸 1.876g SDS 10-20g 使用时,15min×3次 10%福尔马林(4%甲醛) 甲醛与水体积比1: 9。 DMEM双抗培养基 DMEM培养基粉末一袋 加去离子水至1L 青霉素 100U/ml 链霉素 100μg/ml 调节pH至7.6,过滤灭菌,4℃保存。临用前,加入10%新生牛血清(NBS)。 磷酸缓冲液(PBS) NaCl 8.0g KCl 0.2g Na2HPO4.12H2O 3.58g KH2PO4 0.27g 加去离子水至1000ml,高压灭菌,4℃保存。 Tris-Cl(1.5 mol/L pH 8.8) Tris 182 g 去离子水 800ml 用浓盐酸调pH至8.8,加水至1000ml。 Tris-Cl (0.5mol/L pH 6.8) Tris 60.5 g 去离子水 800ml 用浓盐酸调pH至6.8,加水至1000ml。 4×Tris-HCl /SDS(pH6.8) Tris 6.05g 去离子水 80ml 用HCl调节pH至6.8,加去离子水至100ml,过滤后加0.4gSDS,4℃保存。 6×电泳加样缓冲液 4×Tris-HCl/SDS(pH6.8) 7ml DTT 0.93 g SDS 1 g 溴酚蓝 1.2mg 甘油 3ml 加去离子水至10 ml,分装,-70℃保存。 封闭液(5%) 脱脂奶粉 5 g TBST缓冲液 100 ml 细菌裂解液(100ml) 50 mM Tris pH 8.0 20% 蔗糖 10% 甘油 2mM DTT 4℃贮存,临用前加入蛋白酶抑制剂。 MagneGST™ Binding/Wash Buffer Na2HPO4 4.2mM KH2PO4 2mM NaCl 280mM KCl 10mM 冲洗液(Rinse buffer,100ml) 50 mM Tris pH 7.5 1% NP-40 10% 甘油 100mM NaCl 2mM MgCl2 4℃贮存,临用前加入蛋白酶抑制剂。 LB液体培养基 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 完全溶解后,用5mol/L NaOH调节pH至7.0,去离子水定容至1000ml,高压灭菌。 若需LB固体培养基,则在1000ml液体培养基中加入15g琼脂粉,高压灭菌,冷却至50-60℃,倒入平板,待冷却凝固,4℃保存。
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