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实验室常规试剂配方

 演戲599 2020-07-05

PMSF蛋白酶抑制剂100 mmol/L

  1. 0.0174 g溶解于1 mL异丙醇中。

PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25的失活速率高于4pH值为8.0时,20μl mmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。

RIPA蛋白裂解液100 mL

Triton X-100              1 mL

Tris.ClpH6.8  0.5 mol/L    10 mL

EDTA                    29.225mg  (EDTA.2Na 37.224 mg)

SDS                     0.1g

脱氧胆酸钠              1 g

NaCl                    0.876 g

使用之前,每1 mL上述溶液中,加PMSF  5μL, cocktail 10μL

考马斯亮蓝染色液100 mL

在甲醇::冰乙酸体积比为45:45:10,共100ml中加入0.25g的考马斯亮蓝R-250

脱色液30%甲醇100mL

30 mL 甲醇 + 10 mL 冰乙酸+ 60 mL H2O

Trypsin(胰酶)0.25%

  1. 0.625g胰酶溶于250 mL 1×PBS,溶解2~3h

EGF

储液2ng/μL10μLEGF (200 μg/mL)加入1mL 0.1% BSA10mmol/L乙酸中;

工作液10ng/mL: 10μL储液加入到2mL培养液中。

BSA蛋白标准

1%BSA=10mg/mL=0.145 mmol/L   0.1%BSA=1mg/ml

TBS

10×TBS

Tris.Base                   24.23 g

NaCl                      80.06g

定容到800 mL,用浓HCl调到pH7.6,再定容到1 L

1×TBST:用10×TBS稀释10倍,并加入0.1%v/vTween 2.0

结晶紫1%

  1. 0.1 g结晶紫溶于10 mL甲醇。

10×TAE

Tris                        48.4 g

冰乙酸                    11.42mL

EDTA 0.5 mol/L              20 mL (或称取2.9225 g)

加水至1 L, pH8.0

双抗培养液

青霉素:100 U/mL

链霉素:100 U/mL

10×SDS-PAGE电泳缓冲液1L

Tris                         30g

甘氨酸                      144g

SDS                         10g

0.5M Tris-HClpH6.8,250ml4℃保存)

Tris15.125gHCl调节pH6.8.

1.5M Tris-HClpH8.8,250ml4℃保存)

Tris 45.5gHCl调节pH8.8.

甘氨酸缓冲液250ml

甘氨酸                      0.938g

NaCl                        2.194g

HCl调节pH2.5,室温保存

4×Tris-Cl/SDSpH6.8100ml

Tris                         6.05g

HCl调节pH6.8,过滤后家0.4g SDS4℃保存

2×蛋白上样缓冲液loadingbuffer100ml

4×Tris-Cl/SDSpH6.8         25ml

甘油                         20ml

SDS                          4g

溴酚蓝                       0.2g

DTT                         3.1g

1ml分装,-70℃保存

转膜缓冲液1 L

Tris                        3.07 g

甘氨酸                    14.4 g

甲醇                      100 mL

先用去离子水将固体溶解后,临用前加甲醇并定容至1L

SDS 10%

SDS                                                     10 g

去离子水                          100 ml

Stripper BufferpH2.0,1L

甘氨酸                     1.876g

SDS                       10-20g

使用时,15min×3

10%福尔马林4%甲醛)

甲醛与水体积比1: 9

DMEM双抗培养基

      DMEM培养基粉末一袋                  加去离子水至1L

      青霉素                                 100U/ml

      链霉素                                 100μg/ml

      调节pH7.6,过滤灭菌,4保存。临用前,加入10%新生牛血清(NBS)。

磷酸缓冲液PBS

      NaCl                                    8.0g

      KCl                                      0.2g

      Na2HPO4.12H2O                          3.58g

KH2PO4                                  0.27g

加去离子水至1000ml高压灭菌4保存。

Tris-Cl(1.5 mol/L pH 8.8)

Tris                                                           182 g

去离子水                                                800ml

      用浓盐酸调pH8.8,加水至1000ml

Tris-Cl (0.5mol/L pH 6.8)

Tris                                                  60.5 g

去离子水                                                800ml

用浓盐酸调pH6.8,加水至1000ml

4×Tris-HCl /SDSpH6.8

      Tris                              6.05g

去离子水                                  80ml

HCl调节pH6.8,加去离子水至100ml,过滤后加0.4gSDS4℃保存。

电泳加样缓冲液

4×Tris-HCl/SDSpH6.8                        7ml

DTT                                                             0.93 g

SDS                                                             1 g

溴酚蓝                                                      1.2mg

甘油                                                          3ml

加去离子水至10 ml分装-70℃保存。

封闭液5%

脱脂奶粉                                                 5 g

TBST缓冲液                             100 ml

细菌裂解液100ml

50 mM Tris pH 8.0

20% 蔗糖

10% 甘油

2mM DTT

4℃贮存临用前加入蛋白酶抑制剂。

MagneGST™ Binding/Wash Buffer

Na2HPO4                   4.2mM

KH2PO4                    2mM

NaCl                       280mM

KCl                        10mM

冲洗液Rinse buffer100ml

      50 mM Tris pH 7.5                   

      1% NP-40

      10% 甘油

      100mM NaCl

      2mM MgCl2

         4℃贮存临用前加入蛋白酶抑制剂。

LB液体培养基

胰化蛋白胨                                                  10g

酵母提取物                                                  5g

NaCl                                                              10g

完全溶解后,用5mol/L NaOH调节pH7.0,去离子水定容至1000ml,高压灭菌。

若需LB固体培养基,则在1000ml液体培养基中加入15g琼脂粉,高压灭菌,冷却至50-60℃,倒入平板,待冷却凝固,4℃保存。

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