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为什么不能用甲基绿鉴定提纯的DNA？ 为什么甲基绿和吡罗红要混合使用，且要现配现用？ 广州执信中学 刘立翔 2011年深圳高三理综的Ⅰ模的24题出现了要考生判断“在DNA粗提取和鉴定实验中，能否可以用甲基绿代替二苯胺对提纯的DNA进行检测？”，答案是否定的，为什么？ 原因可能是甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色，而且是在常温下进行的反应，对于聚合程度低的DNA则不容易结合；而二苯胺与DNA相遇会变成蓝色的原理是：DNA在酸性条件下加热，其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸，而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖，与二苯胺试剂反应生成蓝色物质，这一反应的条件是在沸水浴环境下进行的。显然甲基绿和二苯胺与DNA进行的颜色反应的原理和反应的条件是不一样的，而对于提纯了的DNA，更适合用二苯胺在沸水浴条件下进行检测。附：2011年深圳高三理综Ⅰ模第24题：下列有关实验的叙述，正确的是（答案：BD） A.在DNA粗提取和鉴定实验中，可以用甲基绿代替二苯胺检测 B.用斐林试剂检测还原性糖时，可以用葡萄汁代替苹果或梨匀浆 C.在观察洋葱根尖细胞有丝分裂时，可用表皮细胞代替根尖细胞 D.平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用方法 顺便谈一下，为什么甲基绿和吡罗红要混合使用，且要现配现用？原因是甲基绿—吡罗红为碱性染料，它们分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与吡罗红作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；吡罗红与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。这两种染料在混合染液中有竞争作用，两种核酸分子都是多聚体，只是聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色，而吡罗红则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和吡罗红结合呈现红色）。即RNA对吡罗红亲和力 |
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