甲基绿与吡罗红

甲基绿与吡罗红

    问题：必修一《观察DNA和RNA在细胞中的分布》实验中，甲基绿与吡罗红染色剂为什么一定要混合使用？

一、甲基绿

      甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。溶于水，显蓝绿色。为碱性染料，它易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。又称双绿SF。绿色晶体，具金黄色光泽，或淡绿色粉末。溶于水，呈蓝绿色。微溶于乙醇，不溶于乙醚、戊醇。

二、吡罗红

     吡罗红，又名派洛宁G，吡罗红使RNA呈现红色，常用于检测细胞中RNA的分布，常与甲基绿一起混用即为甲基绿—派洛宁（methyl green-pyronin），碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。

三、混合使用的原理

当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色）。即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。

甲基绿和吡罗红都可与DNA 结合而被染成相应的深色， 但甲基绿与DNA 结合能力比吡罗红强且稳定；已被甲基绿染色的DNA 再难以被吡罗红染色，而已被吡罗红染色的DNA 易被甲基绿再染色；RNA 与吡罗红结合能力比DNA 强。因此，用甲基绿吡罗红混合液染色时，DNA 首先与甲基绿结合， 而使之染为绿色，而不再与吡罗红结合；RNA 则与吡罗红结合,而使之染为红色。所以用混合液染色，两种染液基本是互不影响。

     正因上述原因，若甲基绿和吡罗红单独使用时，则细胞内的DNA 和RNA均可与之结合， 结果DNA 和RNA 均被染为绿色或红色。由于细胞核中的核酸比细胞质更密集，细胞核对甲基绿或吡罗红的亲和力比细胞质强，因此这两种染液都使细胞核染色深，细胞质染色浅；细胞核被用甲基绿吡罗红混合液染色与被用甲基绿单独染色，存在一定差异，单独染色偏绿一些，混合液染色偏蓝一些，这说明用混合液染色时细胞核被甲基绿染色的同时也被吡罗红染色， 只不过吡罗红着色很浅，对甲基绿染色效果影响甚微。