|
食品伙伴网食品论坛，在2009年为食品伙伴网资深网友，山东出入境检验检疫局leizhw雷质文老师开通了“食品微生物监测技术和实验室质量管理”专栏，开通至今，雷老师以自身知识和经验，为广大网友解答食品微生物相关问题，帮助很多网友解决了工作中的问题。
感谢雷老师，今后会陆续汇总了雷老师专栏中的问题解答给大家参考，希望对大家的工作有所帮助。 leizhw（雷质文）简介：
食品伙伴网资深网友。
山东出入境检验检疫局食品农产品检测中心品质保证部部长，研究员，在食品微生物检测领域有多年工作经验，所属实验室多次迎接欧盟和美日官方检查。
国家标准 《GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测》主要起草人，在食品微生物实验室质量控制领域有深入研究。
曾主编过多部专著，如《食品微生物实验室质量管理手册》《肉及肉制品微生物监测应用手册》等。 huangji5371
我们检测大肠杆菌选用了SN/T 0169-2010中的葡萄糖苷酶荧光法，其中用到的培养基LST-MUG和Columbia-MUG琼脂，在做培养基技术性验收时，在GB 4789.28或SN/T1538.2没找到相应的质控菌株要求，
请教一下：
1、在肠杆菌科中，可以用于验证这两种培养基的阳性（有荧光）和阴性（无荧光）菌株都大概有哪些？
2、培养基供应商的质检报告中用了大肠杆菌（阳性，产气，有荧光），大肠杆菌O157（阴性，产气，无荧光），作为标准菌株的大肠杆菌O157有无毒菌株，是吗？ Leizhw
1、在肠杆菌科中，可以用于验证这两种培养基的阳性（有荧光）和阴性（无荧光）菌株都大概有哪些？
--------阳性-----大肠杆菌（阳性，产气，有荧光），如板岐肠杆菌等；
--------阴性-----大肠杆菌O157（阴性，产气，无荧光）。
2、标准菌株的大肠杆菌O157是致病菌，应在生物安全二级实验条件(GB 19489)下操作。 yxj9666
关于细菌总数样液的稀释，标准25克加225毫升生理盐水制作1:10的样液，是否可以10克样品加90ml的生理盐水制作1:10的样液呢？我感觉是可以的。 Leizhw
还是按照标准规定进行测试吧。否则属于方法偏离，需要进行方法确认、编写SOP、法人代表审批，甚至客户同意。 Jeffwong
关于微生物检测方法确认、方法验证和方法证实，我有几点疑问：我的理解是对于实验室自己的新方法或者改动后的方法在使用之前要与标准方法进行比对，验证其特异性、灵敏度等等是否满足测试要求；方法证实就是看实验室有没有能力开展标准方法检测。我不明白的地方是，评审过程中评审老师说所有的标准方法也需要坐方法验证，基准方法要怎么选呢？如果是要做标准方法证实，我们应该参照什么呢？ Leizhw
1、方法验证=方法证实，但方法证实≠方法确认；
2、计划使用ISO、GB、SN、DB等标准方法前，需要进行方法证实，即明确人、机、料、环、测、溯的满足程度；
3、对于费标准方法、偏离标准方法流程的方法、范围超过标准方法的方法，需要进行方法确认，请研读SN/T 3266-2013《食品微生物检验方法确认技术规范》
4、关于基准方法：（1）ISO，(2) GB
5、方法确认和证实，请阅读参与主编的《食品微生物检测方法确认和证实手册》。
小小鸟2014
那我是面包类的微生物检测的，但是每次检测出来的菌落总数都是很少的，冬天和夏天比较少，春天就比较多了，不知道这是否是正常现象呢？还有做微生物实验一定要用蒸馏水吗？可不可以用矿泉水做呢？ Leizhw
那我是面包类的微生物检测的，但是每次检测出来的菌落总数都是很少的，冬天和夏天比较少，春天就比较多了，不知道这是否是正常现象呢？
-------正常啊。
还有做微生物实验一定要用蒸馏水吗？
----- 是否可用矿泉水，必须知道其指标是否符合GB/T 27405-2008有关水质的质量要求。符合，则可用 wwxqsy1
我们在日常菌落总数检测时，稀释10倍必需按国标的取25g样加225ml水吗？可以取10g样加90ml水稀释吗？ Leizhw
1、GB 4789.2规定为25g样品+225g稀释液；
2、如果使用水作稀释液，可以，但必须：
（1）最好为蒸馏水；
（2）要对水进行质量监测，至少要调pH至7.0±0.2；、
（3）样品均质后，仍要再调pH至7.0±0.2。
3、故建议使用磷酸盐缓冲液稀释剂。 Fairreach
我本意是想问对某一培养基（主要是商品化）是否需要按附表所列的所有菌株进行验收，还是只要选择一种阳性菌株和一种阴性菌株就可以了。 Leizhw
1、原则上，或者说有条件者按附表所列的所有菌株进行验收；
2、条件有限这至少选择一种阳性菌株和一种阴性菌株进行验证，但对于检测沙门氏菌的培养基，应该有两株阳性菌株，一株产H2S，另一株不产H2S。 Jerrylgz
请教几个问题：
1.新版的香精香料国家标准准备要实施了，对于大肠菌群来说，旧版的单位是MPN／100g，而新版的单位是MPN／100g，标准是不大于15MPN／g，请问这个标准不大于15MPN／g是基于什么得来的？
2.对于新旧两个版本，如果旧版是30MPN／100g，那么是不是就相当于新版的0.3MPN／g？
3.因为我们单位的成品是以MPN／100g为单位的，如果注册的标准是不大于90MPN／100g，而香精是以MPN／g为单位，国家标准是不大于15MPN／g，请问我们改如何控制？显然如果是以是15MPN／g来控制的话，对我们的成品将会导致超标。 Leizhw
1、你的问题描述'新版的香精香料国家标准准备要实施了，对于大肠菌群来说，旧版的单位是MPN／100g，而新版的单位是MPN／100g，标准是不大于15MPN／g，请问这个标准不大于15MPN／g是基于什么得来的？'与GB 30616-2014 《食品安全国家标准 食品用香精》规定不符，请您仔细研读，并研究GB 4789.3-2010的附录B.1；
2、贵单位的规定基于产品标准的卫生指标，采用GB/T 4789.3-2013进行检测。现在产品标准更新了，要执行新标准。 wnb1979
GB4789.28里面培养基和试剂质量要求中进货验收里面有个合格证明，是指合格证吗？可是我们买的是正规厂家的，只有标准菌株有，其它的比如营养琼脂就没有，标签符合，有使用说明，我们一次只买那么两盒，也要索取吗？感觉每个试剂都要索取很麻烦，其实质量都是可以的。 Leizhw
1、GB4789.28里面培养基和试剂质量要求中进货验收里面有个合格证明，是指合格证吗？ 可以认为是合格证。
2、可是我们买的是正规厂家的，只有标准菌株有，其它的比如营养琼脂就没有，标签符合，有使用说明，我们一次只买那么两盒，也要索取吗？
没有表达清楚，请补充说明。啥意思？？？？？？
3、感觉每个试剂都要索取很麻烦，其实质量都是可以的。
1）感觉不能代替规则和实际操作；
2) 万事皆麻烦，不能仅跟感觉走；
3）只有在风险分析（要有事实证明或证据！）的基础上，才能认为“其实质量都是可以的”。 仲华
将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高压锅中的层流蒸汽）使之融化。经过高压的培养基应尽量减少重新加热时间，融化后避免过度加热。融化后应短暂置于室温中（如2 min）以避免玻璃瓶破碎。
融化后的培养基放入47℃～50℃的恒温水浴锅中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴锅温度)，直至使用，培养基达到47℃～50℃的时间与培养基的品种、体积、数量有关。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4 h。未用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培养基尤应注意，融化后保温时间应尽量缩短，如有特定要求可参考指定的标准。
还有就是这里说的：融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4 h是指不管是灭菌前融化还是灭菌后融化，放置的时间都不应该超过4小时是吗？
还有一个老掉牙的问题是，灭菌后的琼脂培养基，能否放在冰箱中备用（不受染污情况下）。如果能，那可放多久？ Leizhw
1、灭菌后融化，放置的时间都不应该超过4小时。
2、灭菌后的琼脂培养基，大部分培养基（有些培养基需要现用现配！！）能放在冰箱中备用（不受染污情况下）。不同培养基放置时间不同，请研读SN/T 1538.1，GB 4789.28相关章节。 Pushful
我们购买的微生物菌株，一次就是两只到三只，但复活的时候一般只需要一株，所以冰箱里购买的微生物菌株已经过期两三年了，科室里有人擅自把过期的密封菌株从2-8℃的菌种保藏冰箱里转移到别的冰箱里，是否违反了生物安全要求？是很大的问题吗？ Leizhw
1、贵实验室对所购买的微生物菌株的使用和管理流程不符合GB 4789.28 & GB/T 27405；
2、“冰箱里购买的微生物菌株已经过期两三年了，科室里有人擅自把过期的密封菌株从2-8℃的菌种保藏冰箱里转移到别的冰箱里”严格说来违反了生物安全要求；
3、没有造成泄漏，没有导致生物安全事故，不是很大的问题。但应执行GB 19489，加强菌种使用和管理，双人双锁。
食品论坛小编整理，问答内容仅供参考。
食品伙伴网，网聚食品人。（http://www.foodmate.net）
|
