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食品伙伴网食品论坛，在2009年为食品伙伴网资深网友，山东出入境检验检疫局leizhw雷质文老师开通了“食品微生物监测技术和实验室质量管理”专栏，开通至今，雷老师一直以自身知识和经验，为广大网友解答食品微生物相关问题，帮助很多网友解决了工作中的问题。
感谢雷老师，今天小编汇总了雷老师专栏中的问题解答给大家参考，希望对大家的工作有所帮助。 食品伙伴网资深网友。青岛海关技术中心，研究员，在食品微生物检测领域有多年工作经验，所属实验室多次迎接欧盟和美日官方检查。 国家标准 《GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测》主要起草人，在食品微生物实验室质量控制领域有深入研究。
曾主编过多部专著，如《食品微生物实验室质量管理手册》《肉及肉制品微生物监测应用手册》等。 问题一 吾在场证明 请问实验室内人员或者方法比对，比如同一人员不同检测方法，或不同人员同一检测方法，比对的评价依据是什么呢？有没有相关标准有说明啊？ Leizhw
1、我主编的《食品微生物实验室质量管理手册》（第二版）第八章；
当前，本案例中不同人员同一检测方法，这个可以参考SN/T 1800；同一人员不同检测方法，需要检测6次以上，可使用配对t检验。 问题二 xuefeiyuli123
雷老师再请教你一个培养基高压灭菌的问题。说明书上：平板计数培养基加热溶解121摄氏度灭菌15分钟，乳糖胆盐发酵管培养基经115摄氏度15分钟灭菌。我想问下，我把2者一同在高压锅灭菌121到126摄氏度时间20分钟，这样可以吗？或2者一同在高压锅灭菌121到126摄氏度时间15分钟可以吗？
觉得2个培养基分开灭菌觉得浪费，再一起灭菌不知怎样做才标准？ Leizhw
1、“雷老师再请教你一个培养基高压灭菌的问题。说明书上：平板计数培养基加热溶解121摄氏度灭菌15分钟，乳糖胆盐发酵管培养基经115摄氏度15分钟灭菌。我想问下，我把2者一同在高压锅灭菌121到126摄氏度时间20分钟，这样可以吗？或2者一同在高压锅灭菌121到126摄氏度时间15分钟可以吗？”
----不可以，乳糖胆盐发酵管培养基经115摄氏度15分钟灭菌的目的是防止高温导致多糖碳化。
2、“觉得2个培养基分开灭菌觉得浪费，再一起灭菌不知怎样做才标准”？
----没有规矩不成方圆。不可一起灭菌。 问题三 雨肖XY
我们实验室想做认可，关于CNAS-CL09-2014中“标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得”，“实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株”，包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制 然后看了4789.28-2013，后面列了各个培养基质控的菌种。
那我们是否应该根据4789的要求重新购买菌种？所有涉及到的培养基的相关菌种都应购买？都要菌种的证书？ Leizhw
CNAS-CL09-2014中“标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得”，“实验室必须保存有满足试验需要的标准菌种/菌株”，包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制 然后看了4789.28-2013，后面列了各个培养基质控的菌种。
1、如果用实验室已有的菌种进行试验，关键生化特征完全符合，我认为没有必要根据GB 4789.28-2013的要求重新购买菌种，毕竟购买菌种的费用不菲。当然，如果实验室有条件，购买GB 4789.28-2013规定的菌株，也是值得肯定的。
2、涉及到的培养基的相关菌种不一定需要购买，其实从食品中分离出来的经过关键特征指标验证的野生菌株，更有价值，建议大家妥善保藏并合理使用从食品中分离的菌株；
3、如果能收集、索取菌种证书，不应该放弃任何机会。证书上的许多信息，对于“研究人员”来说，十分有价值！ 问题四 yiyun121
我们实验室刚刚建立，微生物室目前分三个检测室——无菌室、霉菌室和BSL-2室，现在好几个“专家”过来都说我们的微生物实验室设置不合理，无菌室指完全没有细菌的检测室，可我们这个只是洁净等级七级的检测室所以不能叫无菌室，有的说应该叫限度检测室，有的说是洁净室，有的说干脆就叫食品检测室、微生物检测室。。。。。
各种指导我们的意见都有，麻烦雷老师帮忙解答一下到底应该叫什么？ Leizhw
1、食品农产品微生物检测，叫无菌室，没有问题的。
2、“无菌室”，约定俗成。如果质疑，我只能说该专家是“砖家”。 问题五 huangji5371
GB4789.28-2013附录中，表E.2中孟加拉红培养基生长率的质控菌株为酿酒酵母ATCC9763，黑曲霉ATCC16404，考虑到我们实验室测的是霉菌，
想咨询雷老师的是：
1、真菌标准菌株（黑曲霉ATCC16404），是孢子形式的吗？
2、如果是孢子形式的，细菌的制备工作菌株悬浮液方法，适用于真菌孢子，是吗？ Leizhw
1、真菌标准菌株（黑曲霉ATCC16404），是孢子形式的吗？
-----不一定，一般不是。
2、如果是孢子形式的，细菌的制备工作菌株悬浮液方法，适用于真菌孢子，是吗？
----在本实验背景下，我认为是可以的。 问题六 surfing342
我们做可吸果冻微生物实验，出现一个百思不得其解的现象，有时候会检出菌落总数超100cfu/g，取样是从可吸口向外挤出样品，检出超标后会将同一袋样品从底部用剪刀剪开复检样品，检测结果合格，＜10cfu/g。检出超标后这批产品我们会放置一个月重新灯检，检查是否胀袋，然后没问题再发货。这种情况不是偶尔现象，是经常出现，但是基本没有发现异常，也没有出现客户投诉胀袋。所以想请雷老师分析一下可能的原因，不胜感激！ Leizhw
1、吸口污染？用75%酒精消毒后取样试一试。
2、上层菌数超标，下层复验不超标：
（1）GB 4789.1-2016 8.2明确规定不得复验？
（2）上下层有别，从另一角度说明污染菌为好氧菌，那么真空包装也许可以减低污染概率。（3）对同一批产品扩大取样，如果与第一次结果一致，说明产品本身遭到污染；否则属于测试操作交叉污染。 问题七 huangji5371
我们检测大肠杆菌选用了SN/T 0169-2010中的葡萄糖苷酶荧光法，其中用到的培养基LST-MUG和Columbia-MUG琼脂，在做培养基技术性验收时，在GB 4789.28或SN/T1538.2没找到相应的质控菌株要求，
请教一下：
1、在肠杆菌科中，可以用于验证这两种培养基的阳性（有荧光）和阴性（无荧光）菌株都大概有哪些？
2、培养基供应商的质检报告中用了大肠杆菌（阳性，产气，有荧光），大肠杆菌O157（阴性，产气，无荧光），作为标准菌株的大肠杆菌O157有无毒菌株，是吗？ Leizhw
1、在肠杆菌科中，可以用于验证这两种培养基的阳性（有荧光）和阴性（无荧光）菌株都大概有哪些？
----阳性-----大肠杆菌（阳性，产气，有荧光），如板岐肠杆菌等；
----阴性-----大肠杆菌O157（阴性，产气，无荧光）。
2、标准菌株的大肠杆菌O157是致病菌，应在生物安全二级实验条件(GB 19489)下操作。 问题八 xu542614314
有个问题想请教一下。就是车间空气落菌情况，关于落菌的时间问题。有说五分钟，十五分钟，半个小时的。但是最终标准就是50到100之间。如果一车间生产一盘产品，从第一个开始到最后一个结束，所用时间为10分钟，然后就开始生产下一盘，以此类推。那么空气落菌时间就定10分钟，这样可以不？ Leizhw
1、GB/T 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》规定为5min；
2、在限量给定的情况下，时间越长，对车间微生物控制越好！！！！！！！！！因此10min可以-------仅供参考！ 问题九 吾在场证明 如果以GB 4789.3-2016为例，假如样品非液体，需要稀释，限量<0.92，则样品应该分别稀释十倍，百倍，千倍。0.1稀释度应该取10ml稀释液加入10ml双料中————后面的操作应该是取0.01和0.001稀释度稀释液各10ml稀释液分别加入10ml双料中还是也可以取1ml0.1稀释度稀释液加入10ml单料、取1ml0.01稀释度稀释液加入10ml单料中呢？ Leizhw
1、GB 4789.3-2016中没有所谓“单料和双料”，你这是以GB/T 4789.3-2003的设计案例，试图使用GB 4789.3-2016解答，不科学。 2、GB/T 4789.3-2003 7.2明确规定了“单料和双料”的使用 问题十 706564978
请问下，大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、黑曲霉和白色念珠菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌和产气肠杆菌，这些菌株可以在-20℃下用磁珠保存2年？ Leizhw
我没有这方面的经验和数据，但是：
（1）本案例所列菌株是常见肠杆菌、球菌、霉菌和酵母菌，一般好保存，对环境条件要求不苛刻；
（2）温度越低，保藏时间越长。在-20℃下用磁珠保存2年，存活的概率高于2~8℃冷藏。 问题十一 阿波
我们的产品标准是大肠菌群≤30MPN/100mL,如果我报告成<1CFU/mL，和产品标准又对不上了，那怎么办呀？
Leizhw
原则上没有办法，二者之间没有任何“代数换算”关系。
但是基于经验和风险，仅此一次可以认为所检产品在大肠菌群这个指标上是可以接收的，既没有超标。希望严格执行产品标准。
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