问题1
网友：Xdfd
1.我们实验室最近做空暴的时候发现有金葡生长，想请教您一下金葡污染的可能来源，以及该如何治理，实验室该怎么消毒啊（我们是做乳制品的实验室，平时会接到车间送的过程样和自己保温库送的成品样） 。
2.NY/T1331-2007中关于需氧芽孢和耐热芽孢的报出值，所有板＜10个时，报＜10*1/d，那当所有板为0时，也是这样报吗，为什么不是报＜1/d呢？
Leizhw
1.金葡污染的可能来源很多，人、环境、原料等；实验室消毒：紫外灯+臭氧。
2.NY/T1331-2007中关于需氧芽孢和耐热芽孢的报出值，所有板＜10个时，报＜10*1/d；
所有板为0时，报＜1/d。建议研读SN/T 0330-2012。
问题2
网友：wwxqsy1
目前的一些原料国家标准中规定霉菌和酵母是两者分开：霉菌≤100CFU/mlL，酵母≤100CFU/mL。但有些标准中又是将两个指标写在一起：霉菌和酵母≤100CFU/mL，这样的意思是霉菌和酵母不需要分开计数，两者加起来＜100CFU/mL吗？我们定标准的时候是分开还是写在一起更规范呢？
Leizhw
1.标准如何规定如何执行，不必纠结，即有的GB分开，霉菌≤100CFU/mL，酵母≤100CFU/mL，而另一席标准中霉菌和酵母加起来＜100CFU/mL；
2.只是如果某GB分开，需要制订SOP，规定如何霉菌计数，如何酵母菌计数。
问题3
网友：wwxqsy1
如果某一原料的国家标准规定微生物指标是三级采样法，n=5，c=2，m=100，M=10000 CFU/g，这个标准指标比较松。我们自己的标准比较严是小于10CFU/g但不是三级取样，每次取3个样做而不是5个样。现在必须按照国标做5个样，每个样2个稀释度，每个稀释度做2个平行这样操作吗，如果要严一点该如何定n/c/m/M？可以按照以前的方式做指标定的严一点？
Leizhw
1.GB规定的是三级取样标准，贵实验室为二级取样方法，相同情况下二级比三级严格，执行到位对于产品质量控制更佳；
2.既然有GB明确规定，原则上应无条件执行GB；
3.如果贵实验室认为贵实验室的更好，需要拿出科学严谨的分析报告以及相关证明材料，并且需要监管部门和贵单位高管审批。
问题4
网友：Detin
请教一个GB 16740-2014保健食品的问题。
致病菌（沙门和金黄色葡萄球菌）限度的写法是≤0/25g，和以前每25g中不得检出，在检测意义上有没有区别？
具体落实到采样方案上，按4789.1执行，是否意味着就要引入（n,c,m)的概念，即2级采样方案呢？
这样一来≤0/25g，是否意味着（m=0/25g）呢？但n的取值又该是多少呢？
现在只能查到预包装食品致病菌检验的（n,c,m）；保健食品貌似查不到。
另对于进出口的保健食品，出入境检验微生物检验的取样方案是怎样执行的呢？
Leizhw
1.致病菌（沙门和金黄色葡萄球菌）限度的写法是≤0/25g，和以前每25g中不得检出，在检测意义上有没有区别？
--基于三级抽样方案：“致病菌（沙门和金黄色葡萄球菌）限度的写法是≤0/25g”，基于二级取样方案：“每25g中不得检出”。
2.具体落实到采样方案上，按4789.1执行，是否意味着就要引入（n,c,m)的概念，即2级采样方案呢？这样一来≤0/25g，是否意味着（m=0/25g）呢？但n的取值又该是多少呢？
--请阅读GB 29921和GB/T 30642-2014《食品抽样检验通用导则》
3.关于进出口的保健食品，出入境检验微生物检验的取样方案，目前无材料提供，一般情况下参照食品执行。
问题5
网友：Vibrio
微生物计数和杀菌率的计数的检测结果数字修约是否遵循GB/T 8170-2008？比如杀菌率实验组的平均菌落数为2.2*103CFU/mL，对照组的平均菌落数为为1.6*106CFU/mL，最后计算杀灭率的时候，我可以取多少个有效位数，标准没有做规定，请赐教!!
Leizhw
微生物计数和杀菌率的计数的检测结果数字修约是否遵循GB/T 8170-2008？
--理论上需要遵循，但考虑到微生物/菌类是“细胞水平”，实际上未完全执行。
比如杀菌率实验组的平均菌落数为2.2*103CFU/mL，对照组的平均菌落数为为1.6*106CFU/mL，最后计算杀灭率的时候，我可以取多少个有效位数，标准没有做规定！
--微生物是2位有效数字。其实本案例，你一直执行着。
问题6
网友：nili_0510
我们实验室在配制BS琼脂培养基时，不知道为什么，颜色变成灰黑色，另外换了个锥形瓶，重新配制，颜色又正常了，BS培养基是BD的，在配制的时候关注了下加热时间和温度，好像颜色变成灰黑色和加热时间长也没有什么联系，找不到原因，不知道是不是锥形瓶的问题，但锥形瓶我们也只是用于培养基的配制，想请教您一下
Leizhw
GB 4789.4-2016 附录A.4--BS培养基颜色变化与加热时间有关系的。
问题7
网友：LIULIU2011
车间员工手涂抹后样品做大肠菌群跟细菌总数应该怎么储存呢?如果是放冰箱的话，会不会影响细菌的生长呢？一般细菌都有适合的生长温度，就怕放冰箱会不会杀死细菌？请老师指教。
Leizhw
车间员工手涂抹后样品做大肠菌群跟细菌总数应该怎么储存呢?如果是放冰箱的话，会不会影响细菌的生长呢？一般细菌都有适合的生长温度，就怕放冰箱会不会杀死细菌？
--车间员工手涂抹后样品要求在尽可能短的时间内进行检测，一般不超过4小时；
--放在2-8度冰箱，短期没有问题滴。
问题8
网友：li-ren-zhao
1.我们饼干微生物中菌落总数检测时，样品处理能不能用碾磨，如果不能，需要用什么样的均质器呢？刀片式的，还是拍打式的？
2.饼干这类烘焙食品做微生物检测时，如何避免吸入饼干屑？吸入较多饼干屑对微生物结果有没有影响？
3.饼干国家标准GB 7100进行了变更，将微生物菌落总数指标由原来的夹心2000CFU/g，非夹心750CFU/g，变更为统一标准：n=5,c=2,m=10000,M=100000。并且大肠菌群指定用平板计数法。为什么会跨度这么大？那么菌落总数还有指示意义吗？
Leizhw
1.建议拍打式。其他方式，容易交叉污染。
2.使用带过滤功能的拍打袋。吸入较多饼干屑对微生物结果有影响。
3.与国际接轨，由二级取样方案变化为三级取样方案，有意义。
问题9
网友：liupeng_0204：
GB10765中阪崎肠杆菌指标n=5 c=0 m=0/100g，检测方法指明“计数法”。是否存在错误？检测时应如何操作？是否按第一法操作？
Leizhw：
1.GB10765中关于阪崎肠杆菌和沙门氏菌的规定，是外行人制订GB全中国人民负责验证的行为
2.阪崎肠杆菌标和沙门氏菌的抽样检验方案是“二级抽样方案”，所以应该执行第一法。
问题10
网友：yiyu1976
GB 4789.11-2014溶血性链球菌中提到要做生化，但是没有说具体做哪些生化项目，我们应怎么做？GB 4789.11-2014溶血性链球菌中提到要做生化，为啥在这个版本中增加生化实验，现在厂家试剂都没生产
Leizhw：
1.国外的食品微生物标准体系，大多没有包括溶血性链球菌；
2.关于GB 4789.11-2014 中生化试验，建议使用API STREP，并需要进行方法验证，建立SOP。
问题11
网友：wwxqsy1
像果胶、羧甲基纤维素钠还有果葡糖浆等国标现在对微生物都没有要求，企业是不是也可以不检这些原料的微生物了？果胶、羧甲基纤维素钠溶解起来比较麻烦，操作较困难。
Leizhw：
1.国标现在对果胶、羧甲基纤维素钠、果葡糖浆等没有微生物要求，一般情况下企业可以不检这些原料的微生物了；
2.如果需要了解果胶、羧甲基纤维素钠的微生物状况，可在检测前加用纤维素酶等酶类处理之。
问题12
网友：Zsjzsjzz
霉菌酵母GB 4789.15国标法检测，我们能否根据对比多组样品检测培养三天跟培养五天的结果没有差距或差距不大来做个方法偏离的确认，将霉菌酵母的培养时间缩短为三天啊？
Leizhw：
原则上不可以，特别是对于综合检测实验室，对样品背景不了解。
如果贵实验室仅作相对单一的产品，多年来对产品的霉菌本底了然于心，是可以缩短至3天的。
问题13
网友：藤条妖妖
关于中国药典2015的问题：
1.药典中梭菌的检查：如果哥伦比亚琼脂平板上有厌氧杆菌生长，且氧化酶是阴性的，应进一步进行适宜的鉴定试验，但标准中没有提到鉴定试验有哪些，麻烦老师给推荐几个鉴定试验
2. 白念的培养温度：在培养基的验收上是20-25度，到了检查方法上成了30-35度，是不应该统一成20-25度。
Leizhw：
药典有其特殊性，我是外行。下面的答复仅供参考：
1.药典中梭菌的检查：如果哥伦比亚琼脂平板上有厌氧杆菌生长，且氧化酶是阴性的，应进一步进行适宜的鉴定试验，但标准中没有提到鉴定试验有哪些，麻烦老师给推荐几个鉴定试验
—其实baidu一下便可知道梭菌属的鉴定试验；
—如果经济条件允许，建议购买商业鉴定系统，例如API 20a。
2. 白念的培养温度：在培养基的验收上是20-25度，到了检查方法上成了30-35度，是不应该统一成20-25度。
—不敢班门弄斧，只是觉得作为规则的使用者，按标准规定施检，不会有错。
问题14
网友：706564978
微生物实验室用高压蒸汽灭菌锅，需不需要去考证？我们实验室用全自动的50L的灭菌锅
Leizhw：
首先，高压灭菌锅是特种设备，如果条件允许，培训考证，有益无害。
如果是大容积滴，需要。50L可不用。
问题15
网友：susu919
我看了SN/T 0168-2015的报批稿有如下疑问：
在“6.5 无菌落生长的平板。如果所有稀释度的平板都没有菌落生长，则APC报告为小于1乘以样品的最低稀释倍数，报告时将计算出的APC值标上星号，以表明该数值 是从菌落数在25～250这个范围之外的平板得出的估计值。”如：10-1:0,0;10-2:0,0；10-3:0,0;那结果是报 APC*<10。
但是后面7.3举例则是<25×（1/d），d是得到该计数的样品的最低稀释度的稀释因子。
那对于所有稀释度都没有菌落生长的，结果到底应该报<1/d还是<25×（1/d）呢？
Leizhw：
1.请将正式SN/T 0168-2015 提供本专栏分享；
2.本案例需要研读正式文本后，才能告诉；
3.好好研读SN/T 0330-2012(MOD ISO 7218)，也许你能明白的。
问题16
网友：Zsjzsjzz
致病菌微生物无菌室是负压，里面的湿度一直很高，百分之七八十，有时候甚至九十，该如何控制呢 ，是否要控制到40-60？
Leizhw：
GB 50346-2011 表3.3.2 规定湿度为30%~70%
贵实验室的湿度超过70%，甚至高达90%，的确应该控制和整改，诱因可能是多方面的，需要对症整改。
一方面应确保通风系统高效，另一方面需要控制“致湿源”。
问题17
网友：Xiaonannino
听说有革兰氏染色的对标样品，我们化验室计划购买。我想请教您，是有这样的对标样品么？
Leizhw：
似乎是：
1.革兰氏染色的作用越来越弱，不同的人，即便使用相同的革兰氏染色试剂对同一株菌进行染色，结果可能不一致；
2.即便你买了“对照标品”，可能限定了购买“革兰氏染色”试剂的供应商。
问题18
网友：jkx798
问下做霉菌与酵母计数时，取原液分别1mL注入两个平皿，最后原液的平皿上的菌落形成数的结果是1、0；只做了原液和-1梯度的，-1的结果是0、0，请问这种结果怎么报告？<1.0cfu/mL、0.5CFU/mL还是5.0×10^(-1)？
Leizhw：
1.前面有讨论；
2.请研读SN/T 0330-2012；
问题19
网友：我爱唱歌
我们在做沙门氏菌鉴定时，把要鉴定的项目全做了，发现按照表二来看是非沙门氏菌，但是按照表3来说又符合A3全是阴性，会有这种现象出现吗？为什么会有这种现象出现？
Leizhw：
1.既然按照表2 为“非沙门氏菌”，那么为何继续按照表3进行试验?
2.符合表3之A3全是阴性者，不一定是沙门氏菌，应该按照5.4.2.3补做实验，并进一步推进。
建议：请做好双阳性对照、阴性对照和空白对照。
问题20
网友：yan1148231091
生活饮用水微生物检验方法还是06版的国标，上面菌落总数检验用营养琼脂，请问老师可以用平板计数琼脂吗？
Leizhw：
1.如果你能证明其无显著性差异，可用。否则，不可用；
2.baidu 营养琼脂+平板计数琼脂，可知答案。记得马老师曾解读过。
问题21
网友：Zcxmzjzx
我们使用蒸汽灭菌锅灭菌121℃，20分钟，但是平板里的芽孢总是灭不死，其他的没问题，想知道问题出在哪里？
Leizhw：
培养基里可能有嗜热芽孢，如果不是高压灭菌锅有问题，则应使用另一公司的产品。
问题22
网友：wnb1979
请问准清洁区食品接触面的卫生要求是什么，比如砍生肉用的木质砧板。木质砧板用开水煮后菌落很多，达不到20CFU/cm2
.我们审核老师提出对木质砧板检测，但是执行什么标准我们不知道，也查不到。
Leizhw
1.GB 14881-2013 表A.1
2.可参考 GB《食品安全国家标准》（征求意见稿）
问题23
网友：Yuanxibai
创伤弧菌O/F生化现象如何？NMKL标准有些不太明白。
Leizhw
1.研读了相关标准，似乎只有副溶血弧菌需要o/f 试验（注： SN/T 0173），SN/T 1022对霍乱弧菌没有要求。
2.NMKL 156-1997 中没有明确，所以，如果贵实验室有“创伤弧菌”标准菌株，请“实践出真知”，否则可不要纠结，执行好NMKL 156的“表1 不同弧菌菌种的生化反应特征”即可。
问题24
网友：大小飞虫
我做大肠菌群，MPN 2400,超标，怎么办？
Leizhw
对于大肠菌群超标，应该找出超标原因，然后消灭之：
1.大肠菌群超标，可能来自粪便污染，是否是试验室人员交叉污染呢？
2.切断污染源；
3.产品加工人员应严格卫生操作程序，对生产线进行彻底的常规消毒。
问题25
网友：glhaha0818
想问下 如果做生产用水的大肠菌群，如果按照GB/T 5750.12-2006是一个方法，但是要是按SN标准验食品大肠菌群时，把水当作一种液体做完全是另外一种方法，如果采用sn法是否可行。
Leizhw
GB/T 5750.12-2006的检测基质是“水”，SN/T 0169检测基质是“食品”。
使用SN 0169检测 本应使用GB/T 5750.12方法检测的 大肠菌群，不能武断说不可，但属于方法偏离，使用SN/T 0169检测水中的 大肠菌群之前需要做四件事：
1.偏离方法确认，要证明SN/T 0169与GB/T 5750.12之间没有显著性差异；
2.形成作业指导书；
3.贵实验室的主管签字批准；
4.客户同意。
问题26
网友：秦川大地
关于GB19302—2010发酵乳标准中，“微生物限量大肠菌群规定：n=5,c=2,m=1,M=5，采用GB4789.3平板计数法”检测要求。GB4789.3平板计数法规定，样品稀释液的制作按“6.1样品的稀释“执行，制成1:10的样品匀液，然后按照8.2检验操作。问题是：如果选择两个稀释度，分别为1:10,1:100的去检测，如果在平板上1:10的上长1个典型菌落，经证实是大肠菌群。按照规则报告为10CFU/g,而标准是1和5之间，不能大于5.，如果1:10的平板上没有可疑菌落，报告应为小于10CFU/g,也不符合GB19302标准要求。怎样检测才能满足GB19302标准呢？
Leizhw
尽管本案例"如果选择两个稀释度，分别为1:10,1:100的去检测，如果在平板上1:10的上长1个典型菌落，经证实是大肠菌群"是一个"假设性问题"，反映出部分微生物微生物检验人执行GB 19302-2010 发酵乳，选择1:10,1:100是对发酵乳本底无知的“选择”。
一个基本检测常识和要求: 对于液体样品，在本底未知时，应从原液开始进行测试。
仅仅需要作原液检测即可。
问题27
网友：glhaha0818
水产冷冻厂的产品菌落总数 是应该30度 72小时培养吧？为什么就把水产的单独列出来了？用37度 培养48小时 对比做过 貌似30度长的细菌数更多！
Leizhw
一般水产品种生活环境在30度以内，故30度 72小时培养。
挑战标准规定，勇气可嘉，但不提倡，因为检测人员个人擅自违背标准规定作业，代价会很大的。
问题28
网友：hengrun676
关于金黄色葡萄球菌血浆凝固酶试验，在6小时之内观察没凝固，但是24小时内全部凝固，请问我该怎么报告呢？
Leizhw
1.GB 4789.10 5.3.2条款规定了阳性对照和阴性对照平行试验。如果阳性对照凝固，而阴性对照不凝固，说明一切ok，此时，你说的情况要按GB 4789.10 5.3.2的规定判定，即以6小时的结果为准；
2.如果没有平行试验，违规！如果没有出现“阳性对照凝固，而阴性对照不凝固”，亦违规。
问题29
网友：Kumodaisy
像葵花子那种样品，如果取可食部分检测的话，大家都是怎么处理的呢？太麻烦了，难道真的一个一个剥出来？
Leizhw
1.如果以葵花子是原料/食料，则应以“带壳”葵花子为样品进行检测；
2.如果以葵花籽是原料/食料，则应以“去壳”葵花籽（注：市售葵花籽剥壳机可解决问题）为样品进行检测！
问题30
网友：cathine505
关于GB 29921-2013中方便面米制品有点疑问还请您指教。我们的样品是方便面，应该属于方便面米制品，我们在按照GB 29921-2013进行致病菌（沙门和金葡）评判时，不知道此标准中的限值是专门针对面饼还是面饼与调料一起呢？
Leizhw
应该是面饼与调料一起，因为消费者“混合食用”！
问题31
网友：QHDHANXUELIAN
03版大肠用的乳糖胆盐发酵培养基做技术验收时选择性应用那种标准菌株，在4789.28-2013中没有找到。
Leizhw
1.GB 4789.28-2013 主要对2010年以后的GB 4789进行规定，而GB/T 4789.3-2003是“准”淘汰标准；
2.对于03版大肠用的乳糖胆盐发酵培养基做技术验收时选择性应用那种标准菌株，可以考虑：大肠杆菌（阳性菌株）+金黄色葡萄球菌（阴性菌株）
问题32
网友：新小猫咪咪
GB 29921的致病菌跟强制性产品标准不一致，如何执行？
Leizhw
1.GB 29921-2013规定的“三级取样方案”是微生物限量；
2.根据前法服从后法的原则，如果强制性国家标准是三级取样方案，且产品类别明确在GB 29921-2013中，理应执行GB 29921-2013；
3.如果取样方案不是三级取样方案，或者GB 29921-2013所规定产品种类没有覆盖/包含“该产品”，则不需要执行GB 29921-2013。
问题35
网友：圆圆的圆圆
新发布的GB 4789.11-2014中，是不是革兰氏染色镜检阳性，短链状；触酶阴性，就能够证明检出β溶血性链球菌了呢？还是必须再进行各生化鉴定盒的试验？
还有结果报告的地方：是不是应该写成报告“每25g（mL）检样中检出或未检出β型溶血性链球菌”呀？
Leizhw
标准规定得很详细啊。
GB 4789.11-2014明确规定应对可疑“β溶血性链球菌”，革兰氏染色镜检阳性，短链状，触酶阴性，各生化鉴定盒的试验，然后报告“每25g（mL）检样中检出或未检出β型溶血性链球菌”。
问题36
网友：xu542614314
就是车间空气落菌情况，关于落菌的时间问题。有说五分钟，十五分钟，半个小时的。但是最终标准就是50到100之间。如果一车间生产一盘产品，从第一个开始到最后一个结束，所用时间为10分钟，然后就开始生产下一盘，以此类推。那么空气落菌时间就定10分钟，这样可以不？
Leizhw
1.GB/T 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》规定为5min；
2.在限量给定的情况下，时间越长，对车间微生物控制越好！！！！！！！！！因此10min可以-------仅供参考！
-------我个人认为多培养一天，特别是选择性增菌环节，是没有问题的。
问题37
网友：huangji5371
GB4789.28-2013附录中，表E.2中孟加拉红培养基生长率的质控菌株为酿酒酵母ATCC9763，黑曲霉ATCC16404，考虑到我们实验室测的是霉菌，想咨询雷老师的是：
1.真菌标准菌株（黑曲霉ATCC16404），是孢子形式的吗？
2.如果是孢子形式的，细菌的制备工作菌株悬浮液方法，适用于真菌孢子，是吗？
Leizhw
1.真菌标准菌株（黑曲霉ATCC16404），是孢子形式的吗？
—不一定，一般不是。
2.如果是孢子形式的，细菌的制备工作菌株悬浮液方法，适用于真菌孢子，是吗？
—在本实验背景下，我认为是可以的。
问题38
网友：阿波
我们的产品标准是大肠菌群≤30MPN/100mL,如果我报告成<1CFU/mL，和产品标准又对不上了，那怎么办呀？
Leizhw
原则上没有办法，二者之间没有任何“代数换算”关系。
但是基于经验和风险，仅此一次可以认为所检产品在大肠菌群这个指标上是可以接收的，既没有超标。希望严格执行产品标准，下不为例吧。
问题39
网友：wnb1979
我们做实验要用到50%卵黄盐水悬液，公司不想买成品，有没有规范一点的配制标准呢？要无菌的，怎样灭菌，温度和压力有没有特殊的要求。
Leizhw
1.可baidu；或研读GB 4789.28-2013。
2.重点提示：最好不要买市售鸡蛋，因为圈养鸡蛋中抗生物含量较高，对实验室结果可能影响很大，建议购买SPF鸡蛋，或没有添加抗生素饲料养殖的鸡蛋。
3.GB 4789.28-2013。
