（文章篇）S5E26:别人5分的miRNA是怎么发的？

前面我们谈过Oncotarget杂志，今年（2015年的）又发现影响因子只剩下5分，很多人就得他开始“水”了。

好吧，看看昨天那篇人家的miRNA发了8分，那可别小瞧了今天的5分miRNA，其工作量也是非常的大。

那么现在做非编码RNA的同学可要看一下，这篇文章里提供了研究非编码RNA的一些套路。

The miR-644a/CTBP1/p53 axis suppresses drug resistance by simultaneous inhibition of cell survival and epithelial mesenchymal transition in breast cancer. ( Oncotarget July 08, 2016)

下载链接：http://pan.baidu.com/s/1pLtPj1x    密码：8wmk

先看一下内容：

这里有几个关键词：miR-644a/CTBP1/p53信号轴；细胞存活、EMT分子效应；耐药

miR-644a靶向CTBP1的mRNA（CTBP1能促进肿瘤生长、转移、耐药），所以，miR-644a这里表现为一个抑癌分子。miR-644a下调CTBP1，上调野生型p53或突变型p53，能通过诱导p21或Noxa分别引起细胞G1阻滞或细胞凋亡。

这篇文章如果改成基金：miR-644a/CTBP1/p53信号轴在乳腺癌耐药中作用机制研究

主要内容精彩呈现：

1、研究套路：如何确定分子？虽然这里是研究miRNA的，同样适用于lncRNA！

作者做一个中通量的筛选。

这里作者为什么要选择miR-644a，从命名上可以看到这个分子是一个较新的分子。在肿瘤细胞株里是低表达的。这里也可以选择miR-661、miR-491，也可以研究后面促癌作用的分子。可能作者做了一些验证工作，才选了miR-644a。实在没办法的时候，我们也可以从这里选啊。

接着作者做了一系列的细胞实验，实验发现miR-644a能引起细胞增殖减慢。且在p53突变细胞株中能提升细胞凋亡，并且通过caspase-3标志物验证。在乳腺细胞株（p53野生型）中，miR-644a能影发细胞G1阻滞，且通过细胞周期蛋白验证。

动物实验发现miR-644a能抑制肿瘤生长。

最后通过GEO数据库挖掘，发现在乳腺癌组织中miR-644a表达要高于正常组织。。

关于GEO数据库挖掘，我们后期会专门发文来详细讲解，让大家轻松学会。

2、细胞实验发现miR-644a能抑制转移，且能抑制EMT作用。

动物实验验证，抑制乳腺癌肺转移。临床方面，结合GEO数据库，miR-644a在淋巴结转移的组织中低表达，与病人无远端转移生存率相关。

3、第三部分耐药实验。

a、细胞实验：作者选择了乳腺癌细胞株及乳腺细胞株共4种，且选择了4种常用的化疗药物。过表达这些细胞株的miR-644a，并用化疗药物处理，其中半抑制浓度均有所下降。尤其是阿霉素处理的MDA-MB-231、MCF-7细胞。

b、动物实验：验证了对药物敏感的小鼠移植瘤中，miR-644a是高表达的。

耐药实验主要是细胞实验加动物验证。当然，动物实验部分内容还可以增加，如同样给药，肿瘤大小体积是否变化？小鼠生存期是否延长。

4、研究下游效应分子。

a、靶标分子的选择：作者通过Targetscan，PITA，miRDB三个数据库进行预测，取交集，发现了CTBP1这个分子。且在不同物种间，CTBP1的3’端440-465高度保守，其中存在与miR-644a种子区配对序列。

b、接下来就是常规的干扰和过表达实验，验证它们的直接作用关系。并验证了CTBP1的mRNA结合区在其3’端。它们的表达呈现负相关。

5、验证效应分子CTBP1的功能。

这部分实验内容和第一部分内容完全一样。主要从细胞实验，动物实验来展现。干扰掉CTBP1能降低细胞生存能力，且在p53突变细胞中能提升细胞凋亡，这部分跟第一部分内容过表达miR-644a串到一起。干扰掉CTBP1也能引起细胞周期阻滞。

接下来，动物实验，是这部分内容的两点，作者使用了当下火热的Crispr/cas9技术敲除了实验细胞株的CTBP1。发现小鼠体内肿瘤增长变慢，体积也变小。

接着，干扰掉CTBP1能抑制EMT作用。随后作者分离的肺转移的癌细胞，发现其CTBP1的表达要远高于其亲本细胞。动物实验也证实，敲除了CTBP1（Crispr/cas9敲除）能显著减少肺转移。

6、验证CTBP1与miR-644a是否存在联系。

首先，敲除CTBP1能增加乳腺癌细胞株的药物敏感。由于前面实验发现上调miR-644a也能增加乳腺癌细胞株的药物敏感。是否两者具有一定关联呢？

接着作者做了一个rescue实验：当恢复CTBP1时，过表达miR-644a，细胞的生存能力增加了，并且对药物的敏感度降低了。并且通过抑制miR-644a来恢复CTBP1，能促进细胞EMT作用。

这部分内容确定了CTBP1通过靶向miR644a实现耐药与EMT。

7、miR-644a/CTBP1上调野生或突变型p53，作为细胞周期G1期或细胞凋亡的开关

作者整理一下前面的内容，并且引入周期蛋白p21，凋亡蛋白Noxa。当上调miR-644a时，野生型p53细胞中p21上调，而突变型中Noxa上调。

另外上调突变p53以及miR-644a更加能提升Noxa水平，也更能促进细胞凋亡。由于miR-644a与CTBP1表达负相关，所以沉默CTBP1与上调miR-644a的作用是一样的。

最后作者通过数据库发现，低表达CTBP1病人预后要好。

作为一篇5分的文章，您还觉得水吗？

That’s all. Thank you!

---