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在我们实验中，养细胞是所有实验的基础，肿瘤细胞培养过程中，总会遇到这样那样的麻烦，以下几种情况，你是否遇到，如何解决，大师兄给你指明一二三。 小师弟 如何判断细胞污染了？ 状态 1： 细胞培养液变浑浊了，经常见到是米汤样，黄色液体，一般认为细菌污染。 状态 2：细胞培养基内含有能动的小黑点，一般认为是黑胶虫。 状态 3：胞培养基清亮，但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质，有可能就是真菌感染。 策略：细胞污染了就直接扔了，还得把培养箱用酒精棉球擦干净，并用紫外照射半小时，防止再次污染。同时建议细胞培养时，在培养基中加入青链霉素 (尤其是初学者) 小师弟 细胞培养过程中，细胞周围包括细胞上有很多小黑点，怎么办? 策略 1：用胰酶消化下来后，低速短时间离心，不同实验室不一样，如果平时是 1 000 转 5 min 的话，就可以改为 700 转 3 min，用新的培养瓶培养细胞，细胞收集是少一点，但是一般都能干净很多。多传几代就好多了。 策略 2：如果多次尝试之后还是不干净，就怀疑是否存在支原体污染了，用抗支原体药就 OK 了。一般用上 3～5 天，细胞就干干净净了。 小师弟 细胞培养过程中，发现贴壁细胞表面沾了很多死细胞，传代过程中一直存在怎么破？ 有一招屡试不爽，那就是用 PBS 洗两遍之后，加胰酶进去，晃一晃，迅速将胰酶倒出，再用 PBS 洗一下，再加胰酶正常消化。死细胞由于粘附能力很弱，第一次加胰酶进去以后会掉下来，第二次加胰酶下来的细胞才是活性比较强的细胞。整完一次之后，再次传代方法同上，一般 2～3 次之后，细胞就完好如初了。 小师弟 细胞胞质疏松，状态不好，养不起来，怎么办? 策略 1：一般情况下，从血清下手就行，要么换好血清，要么提高血清浓度，血清浓度提高到 15%～20% 培养 48 h，换成正常 10% 的浓度，用高浓度的血清培养时间过长对细胞有毒性。 策略 2：血清下手之后可以同时采取提高细胞密度的方法，从培养瓶换到六孔板，12 孔板等，细胞密度大，细胞分泌的细胞因子多，肿瘤细胞通过旁分泌途径促进细胞生长。 预防策略：细胞胞质疏松，老化的原因在于细胞传代次数比较多，胰酶消化时间太长，这时候，一定要控制细胞传代次数，注意胰酶消化时间，胰酶消化时间过长，容易导致细胞状态不佳以及胞质疏松。有一招，元元没试过，可以尝试，将细胞冻起来，过段时间复苏，细胞会长得比较好。 小师弟 长途运输过来装满培养液的细胞如何处理? 很多人都会遇到从其他地方买来细胞或者快递运来细胞，装满培养基的培养瓶的细胞怎么处理的问题。 第 1 步：先放 37℃ 培养箱放置 4 小时，这样细胞在通过长途跋涉以后得以稳定，观察细胞状态。 第 2 步：将新鲜培养基和旧的培养基 1:1 稀释，如果细胞状态不好，可以将血清浓度提到 15%，否则正常培养，这样有一个过渡期，不至于细胞换血清之后状态不佳，15% 的血清培养 48 h 之后换成正常浓度培养。 作者：元元 |
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