这些烦恼你懂的...
如果你也有以上这些烦恼,可一定要看完本期我们为你准备的内容和福利啦! 小编我就不卖关子啦 先上福利 本期主角 —— 工具鼠 什么是 “工具鼠”? 具有时空特异性的条件性基因敲除(或敲入)小鼠模型已经越来越多地被人们熟知,并应用到人类疾病、基因功能、遗传发育、谱系示踪等研究领域中。 条件性基因敲除通常是由重组酶系统介导,一般需要通过两类小鼠交配后实现:
一个成功的工具鼠,首先就是要能表达重组酶。但是,光表达是远远不够的,更重要的是在这个小鼠中重组酶的表达模式是符合研究者实验需要的。也就是选择特异性启动子驱动重组酶在(或仅在)特定组织或细胞类型中表达,尽可能排除非特异性表达;或重组酶可响应特定药物的诱导表达,而在无诱导时尽可能的低表达。如此说来,也就不难理解为什么好的工具鼠千金难求了。 常用的重组酶系统 Cre-lox系统:源自于大肠杆菌噬菌体 P1 的重组酶系统,是目前最为常用的重组酶系统。Cre是重组酶,可识别34bp 长的DNA序列 loxP。loxP具有方向性。当 DNA 分子上存在两个同向loxP 序列时,Cre 可将两个 loxP 序列之间的DNA片段切出并环化,同时将 loxP 两侧的序列进行连接。 当 DNA分子上存在两个方向相反的loxP 序列时,Cre 可导致loxP之间的序列发生反转。 Dre-rox系统:与Cre-lox系统类似,具有高效的位点特异性重组活性。可被重组酶Dre识别的DNA序列称为rox位点。可单独使用;或搭配Cre-lox系统使用,实现多功能的基因敲除/过表达。 诱导型重组酶系统: 除了组成型重组酶以外,将经过改造的雌激素受体的配体结合区(ER)引入到重组酶系统中,建立在雌激素类似物Tamoxifen诱导下表达的重组酶系统,如Cre-ERT2或Dre-ERT2等。可以在特定时期诱导实现基因敲除或表达。 工具鼠构建:转基因or基因敲入? 随机插入转基因方式构建工具鼠具有很多不可控因素,例如外源DNA片段整合位点不可控;拷贝数不可控;重组酶基因容易被沉默或发生异位表达等,小则导致工具鼠构建失败,大则给实验带来更多的变数和潜在风险。 相比随机插入转基因,基因敲入(Knock in)方式构建的工具小鼠中重组酶插入位点确定、拷贝数确定,可避免位点效应导致的异位表达或表达沉默,外源基因表达成功率高且稳定。 因此,我们推荐使用基因敲入(Knock in)方式构建工具鼠。 使用工具鼠 一种工具鼠可以与多种你感兴趣的靶基因flox小鼠搭配使用,研究不同基因的作用与功能。 一种flox小鼠也可以与多种工具鼠搭配使用,研究目的基因在不同组织或细胞类型中的功能、在发育或疾病发展不同时期所发挥的作用等等。 因此, 不同的研究项目可能会使用到同一种工具鼠。这样就可以有效的降低定制工具鼠的成本。 |
|