【神助攻系列】慢病毒 or AAV 如何选择？

DNA 传递工具

* 常用的基因传递工具：

(1) 物理方法：显微注射、电穿孔、基因枪粒子轰击法 ；

(2) 化学方法：DNA转染（使用磷酸钙、脂质体、阳离子聚合物、高分子聚合物等）；

(3) 生物方法：主要通过构建病毒载体来完成。包括：逆转录病毒、腺病毒、 单纯疱疹病毒、 腺相关病毒、 其他病毒等。

（本文主角：慢病毒&AAV）

为什么要用病毒来传递DNA ?

* 质粒转染劣势：

(1) 有些细胞很难被转染；

(2) 质粒转染不能使基因长期有效地表达。

而这些劣势，病毒转导都可以实现。

* 慢病毒和AAV主要应用：

(1) 转导ORF来实现蛋白过表达；

(2) 转导shRNA通过RNA干扰(RNAi)实现基因敲低；

(3) 转导荧光素酶报告基因克隆；

(4) 转导CRISPR-Cas9系统实现基因组编辑；

(5) 基因治疗。

慢病毒系统

目前使用的大多数慢病毒系统都源自HIV病毒。慢病毒能将外源基因整合到基因组中使其在分裂和非分裂细胞中都可以保持稳定的表达。

AAV 系统

“AAV”是“Adeno-associated virus”，也即是腺相关病毒的缩写。与慢病毒相似，AAV病毒也是一种理想的外源基因导入细胞的工具，无法自主进行复制，安全性高。

AAV病毒体积比慢病毒小，直径只有20-30 nm（慢病毒直径90-110 nm），相对容易穿透血脑屏障，在活体注射实验上有更大优势。

相对地，AAV能包装的基因片段也比慢病毒小，通常能包装3kb以下的基因片段。

慢病毒 vs AAV

Lentifect™慢病毒系统的特性：

1. 几乎感染所有哺乳动物细胞类型；

2. 可以用来传递相对较大的DNA序列，长度可达5-6 kb左右；

3. 通过慢病毒转导，外源基因随机整合到基因组中，使之稳定表达，进而构建稳定细胞系。

AAVPrime™AAV系统特性：

1. 高滴度——效价的纯化粒子可达到10 ^ 14 GC/mL(genome copies/mL)；

2. 通用——多种血清型可以在广泛的宿主细胞中使用；

3. 低毒性——不整合到宿主基因组中；

4. 低免疫原性——最小的宿主免疫反应；

5. 安全——与人类疾病无关。

*高滴度  ≥ 1×10^8 TU/mL

*实验周期快；部分产品有现货

*小规格分装，避免反复冻融

*100000+个现货ORF质粒，10000+个miRNA上调和下调质粒，5000+个shRNA质粒，5000+个启动子质粒（物种涵盖人小鼠大鼠)，免使用费

高分文献举例

Whole-body imaging of lymphovascular niches identifies pre-metastatic roles of midkine. 2017. Nature, IF 40.137. ORF lentiviral expression vector pReceiver-Lv105-A0792 (MDK) and the corresponding empty vector.

*12 种血清型可选

*预制腺相关病毒颗粒 折后低至 1190 元

*直接用于活体实验 

*定制包装服务范围：ORF/cDNA, shRNA, CRISPR sgRNA, SaCas9

*高滴度：纯化型AAV病毒滴度可达 10^14 GC/mL (genome copies/mL)