|
题记：结直肠癌中的MSI，dMMR，林奇综合征 微卫星不稳定（Microsatellite Instability） 是什么？ 1，首先明确微卫星的概念：人类基因组上的一段串联重复序列（1~6个重复单元），这些微卫星通常位于基因间隔区、启动子、UTR和编码区。举例说明：AGGT(A)26GGGT，该微卫星位于2号染色体，MSH2基因，5号内含子，名称为BAT26。人类基因组上有许多这样的串联重复序列，即微卫星，至少有50万个。 2，Monmorphic microsatellite 与 Polymorphic microsatellite：我们知道人体的细胞内的基因组一半来源于母亲，另一半来源于父亲。那么对于某个特定的微卫星，如BAT26，它的A在母亲基因组上是重复26次，在父亲基因组上也是重复26次吗？并不一定是这样的。如果在人群中统计，该微卫星单元重复次数（> 99%的人群）几乎都是一样的，则Monmorphic microsatellite。如果在人群中统计，该微卫星单元重复次数（> 1%的人群）有不一样的，则Polymorphic microsatellite。 3，微卫星不稳定（MSI）：某些细胞的某个位置的微卫星串联重复次数发生改变。MSI要达到检测水平，需要该细胞进行扩大信号（单克隆或者寡克隆），所以一般MSI常见于肿瘤中。 4，所有CRC患者中，表现MSI的约为15%（林奇综合征3~5%，散发12%~15%），表现No MSI的约为85%（FAP0.5%，散发85%）。 MSI发生的原因是什么？ 基因组在复制时候会发生一些错误，人体类有错配修复系统来识别并修正这些错误。但是如果错配修复系统出问题，那么这些错误可能就无法被正确修复。微卫星复制的时候的错误可能会被保留，如原来的50各重复单元可能会变成60个。 MSI发生有两个原因：1）错配修复基因MLH1, MSH2, MSH6或者PMS2发生胚系突变；2）MLH1基因启动子区域的超甲基化，散发的结直肠癌表现出dMMR几乎属于这种情况。值得一提的是，某些肿瘤即使没有dMMR也表现出低频的MSI，这种情况可以看作是背景噪音。 补充：错配修复基因的缺陷并不会影响所有的微卫星，只是基因组上的一部分。 为什么要检测MSI？ 1，预后：MSI较MSS的CRC患者有更好的预后，不倾向于淋巴结转移与远处转移。HR(OS): 0.65; HR(PFS): 0.67。 2，治疗：MSI较MSS的CRC患者对化疗方案响应可能不一样，其中II期MSI的CRC患者可能不受益于5-FU方案但仍然有更好的预后。 3，诊断：MSI检测有助于筛查林奇综合征。 检测MSI的方法是什么？ 基因组中存在至少50万个微卫星，选取哪些微卫星的状态作为标准是个问题。早期的研究者凭借自己的经验来选取Markers，这不免会引入主观因素。最终形成Bethesda Panel：3个二核苷酸Marker (D2S123, D5S346, D17S250)，2个单核苷酸Marker (BAT26, BAT25)。进一步：MSI-H为40%及以上的Marker表现出不稳定，MSI-L为< 40%且至少有一个Maker表现出不稳定，MSS为无Marker表现出不稳定。 1，PCR法。设计目标微卫星的引物，肿瘤组织与正常组织同时PCR，观察肿瘤组织是否会多出现一个（峰值）克隆片段。如果是，则该Marker提示该微卫星不稳定。针对Bethesda Panel的五个Marker分别设计引物，然后PCR，再根据上述的判定规则可得出结论。 2，免疫组化。由于MSI主要是dMMR引起，因此可以间接的检测MMR相关蛋白以推断MSI状态。通过免疫组化检测MLH1, MSH2, MSH6, PMS2的表达情况，推断MSI情况。以下是染色表达缺失与对应的缺陷基因：（MSH2 and MSH6）[MSH2 or MSH6]；(MSH6) [MSH6]；(MLH1 and PMS2) [MLH1 or PMS2], (PMS2) [PMS2]。 3，测序法。理论上是可行的，但是并未获得广泛共识与使用。目前南京世和运用NGS技术推出了检测22个微卫星以判定MSI状态。 权威指南对MSI检测时机的推荐？ NCCN指南指出： 1，对于所有小于70岁的结直肠癌患者和大于70岁但符合Bethesda Guidelines的结直肠癌患者行林奇综合征筛查（IHC for MMR OR PCR for MSI）。 2，免疫组化发现MLH1表达缺失但BRAF V600E存在，可排除林奇综合征； （解释上述原因：1，BRAF突变与MLH1启动子甲基化有很强的相关性，MLH1启动子甲基化的患者一般都会发生BRAF突变-87%，MLH1启动子不发生甲基化患者一般不或者低表达，免疫组化呈现的结果就是MLH1蛋白表达丢失）； 3，所有II期结直肠癌患者应该行MMR或者MSI检测。 4，所有转移性结直肠癌患者都应该行MMR或者MSI检测。 |
|
|
