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作者通过使用Martini model进行模拟，探究神经酰胺与VDAC1/2的作用位点。模拟发现VDAC1/2 β桶侧边存在结合区域，其中谷氨酸Glu起到重要作用。如果将谷氨酸突变为谷氨酰胺（模拟VDAC3），模拟发现神经酰胺的结合能力会显著降低。在体外实验中，作者将VDAC1/2对应位点的谷氨酸突变为谷氨酰胺，进行探针标记，果然，如图所示，标记信号显著降低。 接下来作者探究神经酰胺对于VDAC1/2功能的影响。首先作者通过转入表达神经酰胺转移蛋白mitoCERT，构造神经酰胺诱导细胞凋亡模型。 然后作者将VDAC1和VDAC2分别敲除，发现只有VDAC2敲除时凋亡得到明显降低。并且，当将VDAC1和VDAC2对应谷氨酸位点突变为谷氨酰胺时，只有VDAC2突变导致凋亡受到抑制。因此VDAC2是神经酰胺诱导细胞凋亡的重要直接作用靶点。 综上，作者通过使用光交联-点击反应神经酰胺探针发现神经酰胺通过激活VDAC2诱导细胞凋亡。 本文作者：YS |
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