西蜀论检之“消失”的“神秘”基因：高手解谜

“消失”的

“神秘”基因

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3、PCR扩增曲线的解读

ABL基因表达拷贝数为 2.27E+06

BCR-ABL P210融合基因表达拷贝数为 3.02E+02

BCR-ABL P210/ABL：0.013%

    本实验室基于实时荧光定量PCR技术的方法，可检出P210亚型，慢粒患者90%以上的t（9:22）染色体易位为P210亚型；BCR-ABL是目标基因，ABL是管家基因，BCR-ABL/ABL可反映表达BCR-ABL融合基因的异常细胞占总细胞的比例。

   图中所示，ABL基因PCR扩增曲线和BCR-ABL P210 融合基因PCR曲线均呈“S型”，提示有扩增。然而本次检测结果显示BCR-ABL P210/ABL比值很低（通常结果应该为多少？），该患者为初诊且染色体核型分析中明确观察到了9号和22号染色体易位，所以考虑融合基因检测结果可能存在问题。鉴于此，进行复查。

重新抽提RNA，检测结果一样。由此可以排除样本放置时间过长导致RNA降解，或RNA提取量较少、样本存在污染、扩增试剂失效、扩增失败、样本错误等可能原因。

BCR-ABL主要存在以上三种亚型，由于P210的引物对不能与P190型融合基因结合，但此次PCR曲线显示BCR-ABL 融合基因有一定扩增，所以可排除P190型。而P210引物对可以与P230型融合基因结合，但扩增序列较长，扩增效率低，符合此次PCR曲线特征。综上所述，考虑该患者可能是P230亚型。因此，检测了该患者BCR-ABL 融合基因的P230型，最终得到结果BCR-ABL P230：5.14E+05，ABL ：1.44E+06，BCR-ABL P230/ABL：35.7%（如图所示）。该患者为少见的单纯表达p230 BCR-ABL的CML。

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病例回顾

患者男，49岁，因“白细胞增高”初诊于我院血液科门诊。

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检查结果回顾

▲血常规：白细胞计数 24.64×10^12/L；幼稚粒细胞百分比 21.80%。

▲骨髓细胞涂片：目前骨髓形态学考虑CML，请结合BCR/ABL融合基因等相关检查和临床。

▲流式细胞分析：有核细胞以下阶段粒细胞为主，部分表达CD56，未见其他异常表型细胞，请结合病史及临床。

▲JAK2V617F 基因检测：阴性。

▲染色体核型分析：46，XY[6/10] / 46，XY，t（9；22）（q34；q11）[4/10]。

▲BCR-ABL 210型融合基因：

BCR-ABL P210：3.02E+02；

ABL：2.27E+06；

BCR-ABL P210/ABL：0.013%。

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背景知识

1、BCR-ABL融合基因检测临床意义

BCR-ABL融合基因是由9号染色体长臂上C-ABL原癌基因易位至22号染色体长臂的断裂点集中区BCR形成。BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病（CML）特征性的分子生物学标志，且其转录水平的动态变化可反映CML的复发、提示预后，定量检测BCR-ABL融合基因对于CML的诊断、临床分型、疗效观察及预后判断有重要意义。BCR-ABL融合基因除可见于95%的CML外，还可见于15％－30%的成人急性淋巴细胞白血病（ALL）和2％－5%的儿童ALL中。

2、BCR-ABL融合基因亚型简介

 在CML中，BCR常见有3个断裂点：M-bcr（P210型）、m-bcr（P190型）、u-bcr（P230型）。绝大多数CML患者融合蛋白为p210 BCR-ABL（b2a2/b3a2），可同时表达p190 BCR-ABL（e1a2），少数患者单纯表达p190 BCR-ABL或p230 BCR-ABL（e19a2）。P230型是BCR-ABL的少见型。

 除了三类典型的BCR-ABL融合基因外，约1%的CML患者其断裂点不在上述常见的位点，从而形成不典型BCR-ABL融合基因亚型，包括e3a2、e6a2、e8a2、e13a2等。

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高手解谜

1、问题及答案

1) BCR-ABL融合基因检测报告能发出吗？（B）

A．  能

B． 不能

2) 若不能发出，可能的原因是？（D）

A  样本放置时间过长导致RNA降解，或RNA提取量较少

B  样本存在污染

C  扩增仪中途断电

D  仅检测了最常见的BCR-ABL 210亚型

E  扩增试剂失效

2、PCR扩增曲线的解读

ABL基因表达拷贝数为 2.27E+06

BCR-ABL P210融合基因表达拷贝数为 3.02E+02

BCR-ABL P210/ABL：0.013%

本实验室基于实时荧光定量PCR技术的方法，可检出P210亚型，慢粒患者90%以上的t（9:22）染色体易位为P210亚型；BCR-ABL P210是目标基因，ABL是管家基因，BCR-ABL P210/ABL可反映表达BCR-ABL P210融合基因的异常细胞占总细胞的比例。

图中所示，ABL基因PCR扩增曲线呈“S型”，且Ct值正常。而BCR-ABL P210 融合基因PCR曲线仍呈“S型”，提示有扩增。本次检测结果显示BCR-ABL P210/ABL比值很低（通常初诊CML该值为50%以上），该患者为初诊且染色体核型分析中明确观察到了9号和22号染色体有40%的易位，所以考虑融合基因检测结果可能存在问题，鉴于此，进行复查。

重新抽提RNA，检测结果相同。由此可以排除样本放置时间过长导致RNA降解，或RNA提取量较少、样本存在污染、扩增试剂失效、扩增失败、样本错误等可能原因。

3、BCR-ABL融合基因PCR原理解释

BCR-ABL主要存在以上三种亚型，由于P210的引物不能扩增出P190型融合基因，但此次PCR曲线显示BCR-ABL 融合基因有一定扩增，所以可排除P190型。而P210引物对可以与P230型融合基因结合，但扩增序列较长，扩增效率低，符合此次PCR曲线特征。综上所述，考虑该患者可能是P230亚型。

4、BCR-ABL P230型融合基因检测结果

因此，检测了该患者BCR-ABL 融合基因的P230型，最终得到结果BCR-ABL P230：5.14E+05，ABL ：1.44E+06，BCR-ABL P230/ABL：35.7%（如图所示）。该患者为少见的单纯表达p230 BCR-ABL的CML。

由此可见，在解读BCR-ABL融合基因结果时，需充分结合患者病情以及染色体核型报告，避免少见亚型的漏检。

本期专家介绍

  叶远馨  医学博士，副主任技师，毕业于四川大学华西临床医学院。中国中西医结合学会检验医学专委会肿瘤分子诊断专委会委员 。主要研究方向为：血液系统疾病的实验室诊断。主持国家自然科学基金1项，参与国家及省部级科研项目5项，获市级科技进步奖1项。公开发表论文10余篇。

  周娟  在职博士，主管技师。主要研究方向：肿瘤液体活检。主持国家自然科学基金-青年基金1项，作为第二主研参与成都市科技局重大项目，参加国家自然科学基金3项，以第一作者或共同第一作者身份发表SCI论文7篇、MEDLINE收录1篇。