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在人类基因组中，均匀的分布着短的串联重复序列，由2-6个串联重复序列构成，这些重复序列被称为微卫星。细胞中的微卫星由于重复序列的插入或者缺失而导致微卫星的改变被称为微卫星不稳定。微卫星不稳定会直接影响癌症患者的免疫用药，同时微卫星不稳定也会影响结直肠癌患者的化疗方案。NCCN等多个指南均建议在癌症患者在进行免疫治疗前须进行微卫星检测，根据微卫星状态来指导患者的用药，制定用药方案。 ctDNA被称为循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA），是原发肿瘤或者转移形成的新肿瘤上掉落下来的DNA片段进入外周血循环系统中，但是其数量少，且检测到的突变所占比例很低。 cfDNA被称为游离DNA（cell free DNA），是由细胞凋亡或者坏死的健康、发炎或者癌变的组织细胞中释放出来的DNA片段，正常情况下会被人体的吞噬细胞吞噬清理掉。  图一 目前检测微卫星状态的技术手段主要包括三种：第一种是利用免疫组化检测错配修复蛋白（MLH1、MSH2、MSH6、PMS2、EPCAM）,第二种是利用多重荧光PCR-毛细管电泳法检测微卫星位点（一般检测5个位点：BAT-25、BAT-26、D2S123、D5S346、D17S250）,第三种是利用NGS测序对微卫星位点（多检测63个位点）进行评估。其中多重荧光PCR-毛细管电泳法检测MSI状态是国际公认的金标准，是NCCN、ASCO等指南共同推荐的检测手段。但这些方法都是对患者的组织样本进行检测，无法在血液中进行微卫星检测。 在2018年ASCO会议上有研究者对200名癌症患者的组织和血液ctDNA进行NGS测序分析，以组织检测为对比，发现ctDNA检测MSI检测阳性率与组织检测一致，一致率达到100%。2019年8月最新研究中通过三个临床研究证实了cfDNA检测MSI的准确性。  图二 1.对949名癌症患者cfDNA和组织检测MSI，比较发现其一致率可达到98.4%。同时利用NGS、IHC和PCR三种技术对cfDNA和组织进行检测发现，NGS检测MSI的准确性更高一些（图二）。 2.对包含16个癌种的28459名癌症患者进行MSI检测，发现cfDNA和组织检测MSI发生率一致性高（图三A）。 3.利用cfDNA检测MSI阳性的16名癌症患者进行免疫治疗后发现患者的客观反应率达到了63%，病程控制率达到了81%（图三B）。  图三 由于组织样本的局限性，导致患者想要进行MSI检测时，患者常无样可测。而血液取样的便利性则无此烦恼。因此血液检测MSI是大势所趋。随着检测技术的提升，血液检测MSI终将会应用到临床。    |
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